β-榄香烯的分离及其脂质体的制备研究

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β-榄香烯是从植物中提取的具有抗肿瘤活性的天然药物,高纯度β-榄香烯的制备及其制剂的开发是降低榄香烯抗肿瘤药物的刺激性等副作用及国家一类新药开发所要解决的问题。本课题主要研究了β-榄香烯的分离过程及其脂质体的制备工艺。以来源丰富的香茅挥发油重组分(含80.5%的β-榄香烯)为原料,采用减压精馏技术,控制真空度2660Pa及回流比5:1,收集95~100℃的塔顶液。经二次减压精馏后,β-榄香烯的含量达到90.6%,经进一步的三次减压精馏实验表明,β-榄香烯的含量并没有明显的提高。以200~300目的硅胶作为层析介质,90.6%β-榄香烯1/100(榄香烯/硅胶,w/w)进料,采用乙酸乙酯:甲醇=1:1作为流动相洗脱,主体的β-榄香烯的含量达到95%。以10%的硝酸银/硅胶(w/w)处理后的改性硅胶作为层析介质,90.6%的β-榄香烯1/150(榄香烯/硝酸银硅胶,w/w)进料,采用石油醚及石油醚:乙酸乙酯(10:1~1:1)作为流动相梯度洗脱,主体的β-榄香烯的含量达到98%以上。β-榄香烯在硅胶上的吸附不符合Langmuir单分子层吸附理论,呈现出比较复杂的吸附特性,这可能与β-榄香烯具有末端三个不饱和双键有关;β-榄香烯在硝酸银硅胶上的配位吸附等温线近似是典型的Langmuir型吸附,β-榄香烯与硝酸银通过σ-π键形成π配合物后紫外光谱发生红移(213nm→252nm)。分别采用薄膜水化(TFH)、逆相蒸发(REV)及REV结合高压挤压法制备β-榄香烯脂质体;光子相关衍射法测量β-榄香烯脂质体的粒径,电子显微镜观察脂质体的形态;以石油醚萃取未包封的β-榄香烯、气相色谱法间接测定β-榄香烯脂质体的包封率;通过离心分离考察不同制备方法及储存时期脂质体的稳定性,从而确定β-榄香烯脂质体较佳的配方组成及制备工艺条件。结果表明,大豆卵磷脂:胆固醇:β-榄香烯=400:40.8:54(w/w)为较佳的配方组成;缓冲溶液对β-榄香烯脂质体的形成和及其稳定性有影响;逆相蒸发结合高压挤压方法制备的β-榄香烯脂质体粒径小(77.4nm)而分布较均匀,且有较高的包封率(99%以上)。
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