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代谢综合征(Metabolic syndrome，MS)是一组心血管病危险因子在人体集聚的状态，包括腹型肥胖、血脂紊乱、高血糖及高血压等，其直接后果是导致严重的心血管病及并发症，甚至死亡，是全球面临的威胁人类健康的一大公共卫生问题。根据最新的国际糖尿病联盟(International Diabetes Federation，IDF)定义，中国有7700万MS患者。已有的研究显示，：MS人群心血管疾病(冠心病和中风)患病率约增高3倍，心血管疾病死亡风险增高5倍，糖尿病风险增高5倍。高甘油三酯血症(hypertriglyceridemia，HTG)、高低密度脂蛋白(Low density lipoprotein，LDL-C)血症、低高密度脂蛋白(High density lipoprotein，HDL-C)血症、高血压、高血糖等代谢异常可通过损伤血管内皮细胞及直接对血小板的作用，使血小板产生一系列变化，最终导致血小板活化、聚集及释放反应。血小板异常活化是血管病变形成的重要机制。
已有的研究揭示，胰岛素抵抗及硝酸盐抵抗是MS患者的一种表现，且对MS患者的血小板功能具有重要的影响，是这类患者易发生血管病变的主要原因之--.
血小板具有独立的一氧化氮(nitric oxide，NO)系统。在我们既往的研究中也发现，血小板源性NO与血小板活化有着直接的联系。NO供体如硝酸甘油(glyceryl trinitrate，GTN)、硝普钠等，可与还原型巯基(sulfhydryl group，-SH)相作用形成NO或S-亚硝基硫醇，NO与细胞内可溶性的鸟苷酸环化酶(guanylatecyclase，GC)上的亚铁血红素辅基相结合，从而激活GC，使细胞内环磷鸟苷(cyclicguanosine monophosphate，cGMP)水平升高，从而抑制细胞内肌浆网Ca<2+>的释放和细胞外Ca<2+>的内流，使胞浆内游离Ca<2+>水平下降，维持血小板的稳定。另外，NO本身就可调节Ca<2+>动员，发挥抗血小板效应。研究发现：GTN呈剂量依赖的方式抑制血小板聚集，但GTN半数抑制浓度(concentration producing 50﹪inhibition，IC50)在胰岛素抵抗患者要明显增高；将胰岛素/血糖，与GTN IC50进行相关分析，发现两者明显相关(r=0.530，P=0.008)，进一步表明胰岛素抵抗患者对NO供体敏感性下降。也就是说，硝酸酯类的抗血小板作用在肥胖等胰岛素抵抗患者是降低的。生理浓度的胰岛素在调节血糖的同时，还可通过：“胰岛素→NO→GC→cGMP→Ca<2+>”途径，以及减少血管活性物质和趋化物质的释放等，从而减少高血压、动脉硬化及血栓病的发病。胰岛素抵抗状态时，胰岛素的上述功能减弱，血小板的稳定性下降，从而增加心血管病的危险。这种观点已经被一些实验证实，在胰岛素抵抗的个体，如肥胖患者、肥胖2型糖尿病患者、高血压患者，胰岛素抗血小板作用减弱或丧失。
富血小板血浆(platelet-rich plasma，PRP)与胰岛素孵育后，胰岛素通过与血小板膜上受体作用，激活细胞内一氧化氮合酶(constitutive nitric oxidesynthase，cNOS)，作用于胞内L-精氨酸(L-arginine，L-Arg)，生成NO增多，血小板聚集功能下降或解聚。大量的研究已证实NO在调节血小板活性中起关键作用。正常情况下，胰岛素处理后PRP血浆中硝酸盐水平(NO水平)上升，如果NO水平无变化或升高较少，可能是胰岛素抵抗的一种体现。
国内关于代谢综合征患者血小板聚集功能改变、血小板胰岛素抵抗及硝酸酯类抵抗，以及胰岛素抑制血小板聚集的调节途径少见报道。
实验目的:
通过观察正常人及代谢异常患者血小板在不同条件下的PAG(M)，以及胰岛素处理后NO水平的测定，以证实MS患者血小板存在胰岛素抵抗及硝酸酯类抵抗现象，并对其可能的机制进行初步探讨。
研究对象与方法:
1标本来源
本院内分泌科、心血管科符合MS(IDF定义)组分的住院病人，以及体检中心健康体检者，正常组11例，代谢异常组45例，采血前2周内未使用抗血小板药物，35-74岁成年人，性别不限。
2观察内容
(1)ADP诱导的正常人和代谢异常患者的PAG(M)；
(2)胰岛素对PAG(M)作用的量效关系；
(3)GTN对PAG(M)作用的量效关系；
(4)PAG(M)与各体质指标及生化指标的关系；
(5)胰岛素孵育后PRP血浆中NO水平；以及PAG(M)与胰岛素浓度、NO水平间的关系。
(6)研究对象的其他体质指标及生化指标，包括身高、体重、腰围、血压、血糖、血HDL-C、血LDL-C、血TG、空腹胰岛素水平及血ALT、AST、Bun及Cr水平，上述指标均按标准方法在实验当日采取。
3实验方法
(1)血小板聚集功能(Platelet aggregation，PAG)测定空腹12小时后采肘静脉血4.5mL，用3.8﹪枸橼酸钠溶液(按1∶9)抗凝，800r/min离心8分钟获取PRP，再将剩余血标本3000r/min离心10分钟，取上清液即为PPP，在光学显微镜下用计数板法测定PRP中血小板浓度，并用PPP将PRP调整至(250～350)×10<9>/L，经PPP调零，在LG-PABER血小板聚集凝血因子分析仪上连续测量5分钟，以PAG(M)为观察指标。ADP的终浓度均为5umol/L。
(2)NO测定对照组及胰岛素孵育组PRP经聚集反应后，再将PRP 3000r/min离心10分钟，取上清液置于EP管中，放置-20℃冰箱保存，待集中测定。采用NO试剂盒(硝酸还原酶法)，严格按试剂说明进行操作。分别取血标本100ul进行测定，加入试剂1、2，混匀后37℃水浴60分钟，然后再加入试剂3、4，混匀静置40分钟后，3800转/分离心10分钟，取上清液0.4ml置于塑料试管中，并加入显色剂0.6ml，混匀，室温下静置10分钟，以蒸馏水调零，550nm波长，0.5cm光径，以7230G分光光度计测定各管吸光度值。 NO含量=(测定管吸光度一空白管吸光度)/(标准管吸光度-空白管吸光度) ×100umol/L。
(3)各项体质指标按标准方法在实验当日进行测量；
(4)其余各项指标同时在本院生化实验室及内分泌实验室进行测定。
4统计分析
(1)所有数据均应用SPSS10.0统计软件处理，检验水准定为P≤0.05有统计学意义。
(2)抑制率的计算公式：抑制率(﹪)=(空白对照组-用药后值)/空白对照组×100﹪
(3)计量资料的描述用均数±标准差(x±s)表示。
(4)两独立样本均数的t检验。
(5)多组均数比较的方差分析。
(6)变量间的相关分析。
(7)多因素的线性回归分析。
结果:
1 ADP(5umol/L终浓度)为诱导剂时，正常组(11例)平均：PAG(M)为(46.55±6.53)﹪；代谢异常组45例，其平均PAG(M)为(61.99±10.43)﹪；经独立样本均值的t检验，P<0.01，差异有统计学意义。其中1、2、3、4、5项代谢异常组PAG(M)(﹪)分别为： 48.58±6.35、61.83±10.11、66.53±8.20、67.44±7.12及65.13±4.55，进行方差分析发现：1项代谢异常组PAG(M)与正常组比较，P值=0.563，两组差值没有统计学意义；而2、3、4、5项代谢异常组PAG(M)与正常组比较，P值均P<0.01，差异有统计学意义。
2 GTN呈浓度依赖的方式抑制血小板聚集，正常组与代谢异常组的GTNIC50分别为33、56umol/L。
3胰岛素呈浓度依赖的方式抑制血小板聚集，正常组与代谢异常组的胰岛素IC50分别为597、1353pmol/L。
4正常组与代谢异常组的平均年龄没有统计学差异，体重指数、腰围、血压、血TG、血HDL-C、血LDL_C、血糖及IN(HOMA-IR)均存在统计学差异。考虑到肥胖、血压、血糖、血TG、血HDL-C以及血LDL_C对血小板聚集功能的影响，我们以：PAG(M)为因变量，腰围、血压、血糖、血TG、血HDL-C以及血LDL C作为自变量，进行多因素的线性回归分析，发现：腰围、血糖及舒张压纳入回归方程。
5胰岛素孵育后PRP血浆中NO水平升高；随胰岛素浓度升高，NO水平升高，而PAG(M)降低。
结论:
1 ADP诱导的PAG(M)在2项及2项以上代谢异常的MS患者明显升高。
2 GTN以浓度依赖的方式抑制血小板聚集，但在代谢异常患者其抑制血小板聚集的作用较正常人降低，说明代谢异常患者血小板存在GTN抵抗。
3 胰岛素以浓度依赖的方式抑制血小板聚集，但在代谢异常患者其抑制血小板聚集的作用较正常人降低，说明代谢异常患者血小板存在胰岛素抵抗。
4 在MS各项指标中，以胰岛素抵抗为代表的腹型肥胖及糖尿病血糖调节异常对血小板聚集功能的影响最大。
5 血小板NO释放增加可能是胰岛素抑制血小板聚集的机制之一。