HMGB1调控p120ctn/MMP7信号通路在结肠癌中的作用

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目的:本课题组前期研究发现人高迁移率族蛋白B1(HMGB1)通过调控p120连环蛋白(p120ctn)的表达从而影响结肠癌细胞的侵袭和迁移,但其中的具体机制还鲜有报道。基质金属蛋白酶7(MMP7)是影响肿瘤侵袭的重要因子之一,本实验通过研究结肠癌中HMGB1、p120ctn以及MMP7的表达及其之间的关系,证明HMGB1可能通过下调p120ctn,增强MMP7表达,从而促进肿瘤的侵袭和转移。  方法:采用免疫组织化学法检测80例结肠癌以及42例对应癌旁结肠组织中HMGB1、MMP7和p120ctn的表达及分布情况;用Western Blot技术检测结肠癌及癌旁正常组织中HMGB1、p120连环蛋白以及MMP7的表达情况。用重组人HMGB1刺激培养结肠癌(LoVo)细胞后,Western Blot技术检测LoVo细胞中p120ctn和MMP7表达的变化;应用瞬时转染及Western Blot技术检测HMGB1对p120ctn/MMP7信号通路的影响。  结果:  1. HMGB1、MMP7和p120ctn在结肠癌组织中的表达及其相关性  (1)免疫组化分析表明,p120ctn的异常表达与肿瘤的大小以及分级呈正相关,而与患者年龄、性别、肿瘤分期、淋巴结及远处转移、Duke及临床分期无明显相关性。此外,HMGB1和MMP7的表达与临床病理特征之间数据分析没有表现出明显的相关性。  (2)结肠癌组织中p120ctn细胞膜上表达降低(71.25%),而HMGB1细胞核内表达增加(88.75%),MMP7胞质中表达增加(86.25%)。且p120ctn与HMGB1及MMP7表达均呈负相关。  (3)Western Blot结果显示,对比正常组织,在结肠癌组织中HMGB1及MMP7蛋白表达增加,p120ctn蛋白表达减少(侵袭性结肠癌组织中变化明显)。  2.结肠癌细胞中HMGB1对p120ctn/MMP7信号通路的影响  (1)采用不同浓度的重组人 HMGB1(80,400,2000 ng/ml)分别刺激培养LoVo细胞24小时,结果发现,相比于对照组,刺激浓度为2000ng/ml的实验组细胞内p120ctn蛋白表达明显减少,MMP7蛋白表达明显增加;但浓度依赖性不明显。  (2)将p120ctn1A和3A的质粒分别转染入LoVo细胞24小时,随后给予重组人HMGB1(2000 ng/ml)刺激24小时,结果发现,与对照组相比,转染1A组细胞中MMP7蛋白表达明显降低,而转染3A组细胞中MMP7蛋白表达变化不如1A组明显。  结论:HMGB1可能通过下调p120ctn的表达,增强MMP7蛋白的表达,从而促进结肠癌的侵袭和转移。
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