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目前,室内环境甲醛污染问题日益严重,亟待解决。本研究利用基因工程手段,通过农杆菌介导法将外源甲醛代谢相关基因(rmpB和rmpA基因人工融合成 rmpBA基因)转入花卉植物中,以期改善植物吸收代谢甲醛的能力,提高其实用价值。主要研究内容如下: 1.百合组织培养体系的优化 以亚洲百合普瑞头的鳞片和叶片为外植体,研究了不同浓度激素组合的培养基对鳞片不定芽的诱导与分化、叶片愈伤组织的诱导与分化以及再生植株生根的影响。结果表明,鳞片不定芽诱导与分化最适培养基为MS+0.5 mg/L TDZ+0.2 mg/L NAA;诱导叶片愈伤组织的最适培养基为MS+0.5 mg/L6-BA+0.5 mg/L NAA+0.2 mg/L KT+0.1 mg/L2,4-D;叶片愈伤组织分化的最适培养基为MS+0.1 mg/L TDZ+0.5 mg/L NAA;不定芽增殖的最理想培养基为MS+1.5 mg/L TDZ+0.2 mg/L NAA;百合植株生根效果最好的培养基为1/2MS+0.5 mg/L NAA。 2.农杆菌介导的rmpBA融合基因对花叶芋和百合的遗传转化 花叶芋遗传转化体系:以花叶芋叶片及叶柄为外植体,黑暗条件下,预培养3 d,农杆菌侵染8 min,共培养3 d,筛选时潮霉素浓度为5 mg/L,同时培养基中添加500 mg/L头孢霉素。愈伤组织形成后移到液体分化培养基中,筛选培养时继续用5 mg/L潮霉素。待抗性芽长出后,转入到含潮霉素5 mg/L的生根培养基中进行筛选培养。 百合遗传转化体系及其优化:探讨了预培养时间、侵染时间及添加NH4NO3和乙酰丁香酮(AS)对转化效率的影响。实验以百合鳞片和叶片为转化受体,于黑暗条件下,预培养3 d,农杆菌菌液浓度OD600为0.5时进行侵染,其中鳞片侵染12 min,叶片侵染8 min,侵染后共培养3 d。鳞片和叶片的潮霉素筛选浓度分别为90 mg/L和15 mg/L,并在后续培养基中均添加400 mg/L头孢霉素以抑制农杆菌的生长。抗性芽长出后转入生根培养基,潮霉素筛选浓度为80 mg/L。实验结果显示,共培养时不添加NH4NO3,预培养和侵染时添加乙酰丁香酮可提高转化效率。 3.抗性植株的分子检测 获得百合抗性植株26株,经PCR检测得到7株阳性植株,PCR阳性率为27%。获得花叶芋抗性植株20株,PCR检测抗性植株,其中6株为阳性植株,PCR阳性率为25%。 对获得的花叶芋和百合阳性植株目的基因表达情况进行RT-PCR和实时荧光定量PCR分析,结果表明人工改造的甲基营养菌rmpB和rmpA融合基因成功在花叶芋和百合中表达。