乙肝转阴散抗乙型肝炎病毒的实验研究

来源 :广西中医学院 广西中医药大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:dongfan1909
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目的:观察乙肝转阴散(YGZYS)体外抗乙型肝炎病毒(HBV)和体内抗鸭乙型肝炎病毒(DHBV)的作用,为研究和开发新的抗乙肝药物提供理论及实验依据。  方法:(1)体外抗HBV的作用:采用MIT法检测YGZYS对HBV基因转染的HepG2.2.15细胞的半数毒性浓度(TC50)和最大无毒浓度(TC0);采用直接加药法观察不同浓度药物在最大无毒浓度(TC0)的基础上对HepG2.2.15细胞的抑制作用;采用血清药理学法观察不同浓度含药血清对HepG2.2.15细胞的抑制作用,分别在第4 d和第8d收集细胞培养上清液,采用ELISA法测定上清液HbsAg和HBeAg的滴度,用FQ-PCR法检测上清液HBV DNA的含量。(2)体内抗DHBV的作用:采用1日龄广西麻鸭感染DHBV,13 d后用PCR法筛选出DHBV强阳性鸭。随机分成5组:YGZYS高、中、低3个剂量组、以生理盐水灌胃的模型组和以拉米夫定(3TC)灌胃的阳性对照组。每组10只,各组雏鸭均灌胃14d。于用药前(T0)、用药7d(T7)、14 d(T14)及停药后3d(P3)分别采血,采用ELISA法测定血清HBsAg或HBeAg的滴度,用FQ-PCR法检测血清DHBVDNA的含量。同时检测血清的转氨酶ALT和AST,并观察肝组织病理学变化。  结果:(1)体外抗HBV的作用:①YGZYS对HepG2.2.15细胞毒性较低,TC50为5.386 mg/ml,TC0为0.736 mg/ml。②无毒浓度和不同浓度含药血清的YGZYS在HepG2.2.15细胞培养中可有效地抑制细胞HbsAg和HBeAg的分泌以及HBV DNA的合成,抑制作用有明显的量效和时效反应关系。③TI均大于2,为高效低毒的抗HBV药物。(2)体内抗DHBV的作用:YGZYS各剂量组用药后血清DHBV DNA滴度显著降低(P<0.05或P<0.01),停药3d后,中、低剂量组和阳性组血清DHBV DNA有明显回升现象,而高剂量组DHBV DNA回升现象不明显。与模型组比较,YGZYS各剂量组能降低血清AST和ALT活性,用药前后血清DHBsAg和DHBeAg的OD值变化与DNA滴度改变相似;其抗病毒效果与剂量大小和时间有一定的关系。此外,鸭肝脏病理学检查发现YGZYS对DHBV引起肝损伤有显著的保护作用。  结论:YGZYS体外及体内有显著的抗HBV的作用,且毒性较低。本研究为进一步深入研究YGZYS作用机制及开发其成为抗HBV药物提供了依据。
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