草鱼“肝胆综合症”病理变化及菜籽粕对其肝脏毒性的研究

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本文采用组织学和生物化学的方法,对肝脏病变草鱼的血液生化指标和肝脏组织结构进行研究,探讨草鱼肝胆综合症的病理变化;同时从营养毒理学的角度研究了饲料中不同比例菜籽粕(0、16%、32%、48%和64%)对草鱼幼鱼生长、生化特性、鱼体组成、肝脏糖原和脂肪含量以及肝脏组织结构变化等方面的影响,为养殖草鱼过程中肝胆综合症的成因做理论基础;并从细胞水平研究了异硫氰酸丙烯酯对原代培养肝细胞的毒性以探索菜粕对草鱼毒性的机制。结果如下:1.与肝脏正常草鱼相比,肝脏病变组草鱼肝脏颜色变淡、甚至变绿;肝细胞发生一定程度的脂肪变性,甚至胀亡坏死;AST、ALT、DB、TB、TG、CRE均显著升高(P<0.05),BUN和CHO含量有增加趋势但差异不显著(P>0.05),UGLU含量和ALP活性无显著性差异(P>0.05);SOD显著性降低(P<0.05),补体C3、C4含量有所降低但差异不显著(P>0.05);肝糖原显著性降低(P<0.05),肝中脂肪含量有所增加但差异不显著(P>0.05)。2.不同菜籽粕替代水平实验结果为:对照组增重率最高,菜籽粕含量达32%以上时与对照组相比显著降低(P<0.05);菜籽粕含量在0~48%各组,日摄食率无显著差异(P>0.05),64%组与其它各组相比显著降低(P<0.05);饲料转化率以16%组最高,32%组最低,但各组间均无显著差异;特定生长率随着饲料中菜籽粕比例的增加而下降,其中以对照组最高,32%组与对照组相比显著性降低(P<0.05);蛋白质效率以16%组最高,48%和64%组与其它各组相比显著降低(P<0.05);粗蛋白质、粗灰分和水分含量均无显著差异(P>0.05);32%组粗脂肪含量最高,16%组其次,48%组和64%组与对照组相比无显著差异(P>0.05),显著低于16%和32%组(P<0.05);随着菜籽粕水平的增加,草鱼血清中胆固醇(CHO)、甘油三酯(TG)的含量逐渐升高但无显著差异(P>0.05),当菜籽粕含量在32%以上时血清尿素氮(BUN)显著升高(P<0.05),各组葡萄糖(GLU)、总蛋白(TP)、总胆红素(TB)无显著性差异,天门冬氨酸转氨酶(AST)、丙氨酸转氨酶(ALT)呈明显上升趋势,但无显著性差异;草鱼肝脏的糖原和脂肪沉积量有显著变化,糖原含量以32%组含量最低,第48%组含量最高,16%组、48%和对照组组间无显著性差异(P>0.05),32%组和64%组间无显著性差异(P>0.05),但与对照组、16%组和48%组相比显著性降低(P<0.05);添加菜籽粕组脂肪含量与对照组相比显著升高(P<0.05),其中以64%组含量最高,32%组其次,64%组和32%组间无显著性差异,而16%组和48%组显著性低于第32%组和64%组;组织切片观察到,在添加菜籽粕16%组发现有出现脂肪变性的细胞,添加菜籽粕32%组,同样存在脂肪变性,同时可见部分细胞发生细胞核发生偏移的现象,随着菜籽粕水平的增加,脂肪变性加剧,脂肪沉积程度更甚,对肝脏的损伤更严重。3.异硫氰酸丙烯酯(AITC)对培养的草鱼肝细胞有影响。未加药物对照组以成活细胞为主,出现部分死亡细胞;10-5mol/L和10-6mol/LAITC浓度组细胞生长情况良好与对照组无区别;10-3mol/L AITC和10-4 mol/L AITC药物组可见一些贴壁细胞成活细胞,部分细胞开始脱壁,逐渐变圆,且发现细胞核偏移现象;10-2 mol/LAITC高浓度组几乎全部细胞死亡后悬浮于培养基中;AST、ALT活性以10-2组最低,显著低于对照组(P<0.05);其它各组与对照组相比AST活性升高,但无显著差异(P>0.05);10-3 mol/L和10-4 mol/L AITC浓度组ALT显著高于对照组和10-2组(P<0.05),10-5mol/L、10-6 mol/L组与空白对照组相比较无显著差异(P>0.05);LDH测定值以10-2 mol/L组最高,10-3mol/L组次之,显著高于对照组,10-4 mol/L、10-5mol/L和10-6mol/L组与对照组相比无显著差异(P<0.05);随着AITC浓度增加,MDA含量呈显著上升趋势(P<0.05)。
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