人表皮生长因子对棘尾虫（Stylonychia）分裂与再生的影响及其免疫学机制研究

• 作 者: 胡莹莹
• 出 处: 哈尔滨师范大学
• 发表日期: 2004年期
• 关键词: 人表皮生长因子 棘尾虫 细胞分裂 创伤再生 免疫荧光

本课题从表皮生长因子可促进棘尾虫细胞分裂以及再生性形态发生的实验现象出发，依据周期蛋白激酶复合物调节细胞分裂周期的理论和表皮生长因子与受体相互作用的原理，采用单克隆培养和人工创伤再生实验，利用蛋白银染色、电镜观察和免疫荧光实验对两种表皮生长因子在棘尾虫细胞分裂与创伤再生过程中的作用和免疫学机制进行了研究。主要研究结果如下：1.采用细胞计数法结合细胞周期同步控制的方法，比较了0.1μg/ml、0.3μg/ml、0.5μg/ml、1μg/ml四种浓度条件下，人表皮生长因子（hEGF）和鼠表皮生长因子（mEGF）对单克隆培养的棘尾虫分裂增殖的长期（50天）和短期（100小时）作用。发现长期培养中hEGF有助于保持种群稳定，短期培养中各浓度hEGF均促进虫体分裂。而mEGF对虫体分裂无促进作用，甚至抑制其种群增长。并进一步比较了三个浓度的hEGF处理的实验组之间，以及实验组与对照组之间在种群密度、种群增长率和增长速率的差异显著性。确定0.3μg/ml浓度的hEGF为进行机理研究的最佳浓度。2.为了探讨表皮生长因子作用于棘尾虫的免疫学机制，对两种生长因子处理后的棘尾虫分别进行了免疫荧光实验。实验结果显示：hEGF可与棘尾虫发生较为强烈的免疫反应，而mEGF与对照组（水）一样，与棘尾虫未发生免疫反应。说明棘尾虫中应该存在某些类似人表皮生长因子受体的物质，可以与hEGF相结合，从而加快其分裂的速度。3.将免疫荧光实验与创伤再生实验结合，观察了人为创伤后不同时间段，hEGF处理组与对照组虫体修复速度以及免疫荧光反应的强度和空间分布的变化，以探讨hEGF对棘尾虫创伤修复过程的作用和机制。结果表明：hEGF处理组虫体修复速度比对照组快，创伤后马上便能观察到荧光反应，且主要集中在伤口部位。术后2h时荧光反应强度达到最大，然后逐渐减弱，并向细胞质和细胞膜部位扩散，至4个小时左右修复完成；对照组虫体创伤后1h才有荧光表达，在4h时达到最强，之后逐渐减弱。说明棘尾虫的创伤修复的确与hEGF的数量和分布位置有密切关系。4.为了进一步确认人hEGF对棘尾虫的作用机制，我们还用透射电镜实验观察了hEGF对棘尾虫超微结构的影响。结果发现：对照组与实验组在膜结构和线粒体亚显微结构方面表现出明显的不同，hEGF培养的虫体膜结构更清晰，线粒体形态更饱满，线粒体内部的嵴更密集。有可能是hEGF促进了细胞生物膜的更新，从而间接促使线粒体呈现年轻状态。也可能是hEGF直接影响到了细胞的能量代谢，从而促进了能量代谢的核心胞器——线粒体的发育。其确切的生物学机制还有待进一步研究。