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高温、干旱和盐碱等胁迫是影响水稻产量和品质的重要限制因子,因此抗逆性的研究已成为重要课题。植物的抗逆性是由多个基因共同调控。转录因子可通过调控下游基因的表达来调控植物对高温、干旱和盐碱等胁迫的响应。在前期研究中,我们筛选到了一批受高温显著诱导表达的基因,对其中一个转录因子OsHsfB2c启动子的功能研究发现：该启动子对高温、干旱等有显著响应,且表现出较明显的幼穗特异性。本研究利用酵母单杂交技术进行了OsHsfB2c启动子上游调控蛋白的筛选,并对该启动子与候选调控蛋白之间的互作进行了验证,为进一步分析上游调控蛋白的功能及水稻耐逆机制提供重要信息。本研究取得的主要结果如下：1：用PlantCARE对OsHsfB2基因ATG上游1500bp的启动子序列进行了顺式作用元件预测与分析,结果表明该段序列除了具有一般真核生物启动子结构所具有的核心保守序列如CAAT box,TATA box外,还含有HSE、G-box、Sp1、GC-motif和ABRE等多个逆境响应元件。2：基于逆境响应元件的分布情况,扩增了OsHsfB2c启动子区的四个片段,并将其克隆至诱饵载体pAbAi+Bait,分别转化到Y1HGo1d,经SD/-Ura陷型平板筛选和PCR鉴定,成功构建了四个启动子片段的诱饵酵母菌株。3：将水稻cDNA文库质粒转化1号诱饵酵母菌株,进行文库的筛选,在含600 ng/mL AbAr的SD/-L(?)u板上总计有47个阳性克隆。对这些阳性克隆中的cDNA入片段进行了菌落PCR扩增,在剔除空载体和小于800bp长度的插入片段的克隆之后,最终得到21个阳性克隆。进一步的测序和生物信息学分析显示,这些候选cDNA编码7大类结合蛋白,包括参与最基本的转录起始、参与蛋白降解、参与非生物逆境响应等,还有一些未知功能的蛋白质等。