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本试验对采集自上海青浦、松江、奉贤、南汇、浦东、嘉定等地区的104株荧光假单胞菌进行了CAS固体平板检测和CAS检测液检测,比较了不同菌株产生PVD荧光嗜铁素的产量,从中筛选出高产菌株SE-6,其PVD相对含量达到0.654。研究了荧光假单胞菌株SE-6在摇瓶培养下的培养基和发酵条件。通过单因素实验和正交优化实验,确定了最佳发酵培养基(1L)组成为甘油1.5g,水解酪蛋白1.0g,硫酸镁2.5g,磷酸氢二钾2.5g,发酵条件为温度28℃,起始pH6.5,接种量2﹪,装瓶量200mL/500mL,发酵时间46h左右,Fe3+浓度0.8mg/L时,SE-6菌株分泌的PVD量达到最大。
对SE-6菌株的发酵液进行了分离纯化。发酵液先经过离心后,除去菌体,再经过有机溶剂抽提,然后用SephadexG-25柱层析分离,得到了PVD提取液。用傅立叶变换红外光谱研究了PVD的主要功能集团,用Arnow分析法和Atkin分析法研究了嗜铁素的类型。前者用于儿茶酚型嗜铁索的检验,后者用于氧肟酸型嗜铁素的检验。结果显示Arnow分析和Atkin分析均成阳性,说明PVD既含有儿茶酚基团又含有氧肟酸基团,是一类混合型嗜铁素。
本试验还利用PVD在螯合铁离子前后其在特定波长的吸光值会发生改变这一特性,设计了一种用PVD来检测水环境中铁离子的方法。首先建立了PVD吸光值变化和铁离子浓度之间的标准曲线,Fe3+在0-2.25×10-6mol.L-1范围内遵守比尔定律。回归方程是:y=-0.00014+0.111238x。然后利用标准曲线来测定未知样品中的铁离子浓度,并对这种方法的准确度和精确度作出了评估。使这种方法可以应用于水环境的铁离子测定中,有助于了解和控制海洋中赤潮的形成。