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目的：通过观察电针防治肝纤维化的效果,在此基础上进一步观察电针对肝纤维化大鼠TGF-β1/Smad信号转导通路的影响,以探讨电针防治肝纤维化的可能的作用机理。
方法：
(1)分组与造模：40只Wistar雄性大鼠随机分成四组,正常组、模型组、药物治疗组和电针治疗组,各组10只,后三组采用30％的四氯化碳橄榄油皮下注射复合含10％乙醇的自来水饮用诱导肝纤维化模型,正常组只注射相应剂量的橄榄油：
(2)干预措施：造模的同时,电针治疗组选取足三里和肝俞进行电针刺激,药物治疗组采用秋水仙碱灌胃；
(3)观察指标及方法：
①采用HE染色和Masson染色方法观察大鼠肝组织病理学变化及胶原增生情况；
②采用盐酸水解法检测肝组织羟脯氨酸(Hyp)的含量；
③采用放免法检测血清透明质酸(HA)、层粘连蛋白(LN)、Ⅲ型前胶原(PC Ⅲ)、Ⅳ型胶原(C Ⅳ)的含量；
④采用免疫组化方法检测α-SMA、TGF-β1、TβRⅠ、TβRⅡ、Smad2/3和Smad7蛋白的表达；
⑤采用实时荧光定量PCR检测I型、III型胶原mRNA的表达；
⑥采用Western-blotting方法检测Smad2和Smad7蛋白的表达。
结果：
(1)与正常组比较:
①模型组大鼠肝细胞出现明显的脂肪变性和坏死；
②肝组织胶原沉积面积明显增加,P<0.01;
③肝组织羟脯氨酸、血清HA、LN、C IV含量明显升高,P均<0.01;PC Ⅲ也升高,但P>0.05;
④Ⅰ型、Ⅲ型胶原m HNA的表达均明显升高,P均<0.01;
⑤Smad2蛋白的表达量明显增高,P<0.01,而Smad7蛋白的表达量增高不明显,P>0.05;⑥α-SMA、TGF-β1、TβRI、TβRⅡ表达量明显上升,P均<0.01。
(2)与模型组比较:
①电针治疗组大鼠肝细胞脂肪变性、坏死明显减轻；
②肝组织胶原沉积面积明显减少,P<0.01;
③肝组织羟脯氨酸、血清HA、LN含量明显下降,P<0.01或P<0.05:C IV、PC III也减少,但P均>0.05：
④I型、III型胶原m RNA的表达均明显降低,P均<0.01;
⑤Smad2蛋白的相对表达量明显下降,P<0.05;而Smad7蛋白的相对表达量明显上升,P<0.05;
⑥α-SMA、TGF-β1、TβRI、TβRII表达量明显下降,P均<0.01;
(3)电针治疗组和秋水仙碱治疗组比较,上述观察指标差异均没有统计学意义,P均>0.05。
结论：
(1)本实验采用四氯化碳诱导的大鼠肝纤维化模型是成功的。
(2)电针治疗能够预防或延缓大鼠实验性肝纤维化的发生,且效果与秋水仙碱相当。
(3)电针防治肝纤维化作用机制可能是通过电针能够保护肝细胞,减轻炎症对HSC的刺激,减少TGF-β1等的释放,通过上调Smad7蛋白的表达和下调TβRI、TβRII、Smad2蛋白的表达,下调I型、III型胶原mRNA的表达的综合作用而抑制细胞外基质的合成,从而起到防治肝纤维化的作用。