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初情期启动的早与迟直接影响动物的性成熟和以后的繁殖性能，但其机制仍不清楚。研究表明，在动物初情期发育的调控中，下丘脑促性腺激素释放激素（gonadotropin releasinghormone，GnRH）神经元所分泌的GnRH是初情期启动的决定性因素。一般认为，动物在初情期之前，下丘脑GnRH神经元对性腺类固醇激素的负反馈作用十分敏感，因而在出生后到初情期前这段时间，下丘脑GnRH的分泌因受性腺类固醇激素的作用而一直处于抑制状态，呈现低幅度、低频率的分泌脉冲；初情期的启动始于下丘脑性腺激素抑制机制的解除，但GnRH神经元上并没有性腺激素受体，那么，在性腺激素调节GnRH分泌机制中，应该有对性腺激素敏感的其他中间神经元介导性腺激素对GnRH的调节作用。近期研究发现，神经激肽B（neurokininB，NKB）和Kisspeptin神经元上均有性腺激素受体的表达，二者均能促进GnRH释放和初情期启动。因此，探究动物初情期启动中NKB、Kisspeptin、GnRH和性腺激素受体间的关系尤为重要。 目前国内外关于NKB、Kisspeptin和GnRH的研究，多集中于NKB、Kisspeptin和GnRH在不同物种中枢神经系统上的定位和其与初情期的关系的研究，缺少对其在生殖轴上整体的定位研究以及对Kisspeptin、NKB和GnRH与性腺激素水平关系的研究。本试验以皮下埋植性腺激素、卵巢摘除等处理方法，以雌性SD大鼠为研究对象，采用免疫荧光三标技术来观察各个组大鼠生殖轴上NKB、Kisspeptin和GnRH的分布情况，运用Image J和Image-pro plus6.0软件分别计数和测量各组大鼠生殖轴上NKB、Kisspeptin和GnRH的阳性细胞数和平均荧光强度，并分析其间的关系及变化规律。同时结合实时荧光定量PCR、酶联免疫和放射性免疫等分析方法，来阐述NKB、Kisspeptin和GnRH在机体性腺激素水平改变时的变化及其三者间潜在的联系，为进一步研究NKB、Kisspeptin和GnRH在雌性大鼠生殖功能上的作用及其机制提供科学的理论依据。 结果显示：（1）E2（29±0.71d）、E2+P4（28±1.53d）、OVX+E2（30±0.38d）、OVX+E2+NKB（28±1.18d）和OVX+E2+P4+NKB（28±0.52d）组大鼠均比Oil（43±1.38d）组大鼠阴门开启的时间显著提前（P<0.01），且这五组间差异不显著（P>0.05）。（2） NKB主要分布于大鼠下丘脑的弓状核、室旁核和腹内侧核，腺垂体以及卵巢的黄体细胞、卵泡膜、颗粒细胞和间质细胞上，且不同部位表达的荧光强度存在差异（P<0.05）。①大鼠弓状核上的免疫荧光强度显著高于室旁核和腹内侧核（P<0.05）。②卵巢摘除组的大鼠弓状核上NKB阳性神经元数显著高于E2和E2+P4组（P<0.05），大鼠室周核上的NKB阳性细胞数目较少（P<0.05），且仅在OVX+E2+P4+NKB、OVX+E2+P4和E2+P4组中分布。③Oil组大鼠下丘脑和腺垂体上的NKB荧光信号显著强于E2、E2+P4、OVX+E2和OVX+E2+P4组（P<0.05）。④大鼠卵巢黄体细胞、卵泡膜和颗粒细胞上的平均荧光强度显著高于间质细胞（P<0.05）。（3）GnRH主要分布于大鼠下丘脑的正中隆起、弓状核和视前区，且以正中隆起处的荧光信号最强（P<0.05）。①E2和E2+P4组大鼠，其下丘脑GnRH的阳性细胞数高于卵巢摘除大鼠（P<0.05）。②大鼠正中隆起处GnRH的平均荧光强度显著高于弓状核和视前区（P<0.05），且同一核团上，E2和E2+P4组大鼠GnRH的平均荧光强度值也较高（P<0.05）。（4）Kisspeptin主要分布于大鼠下丘脑弓状核、室旁核、视前区和室周核。①Kisspeptin的阳性细胞数目以弓状核最高，室旁核和视前区次之，室周核较少（P<0.05）。埋植性腺激素的大鼠室周核上Kisspeptin的阳性细胞数目增多（P<0.05）。（5） OVX+E2、OVX+E2+P4、OVX+Oil、OVX+E2+NKB、OVX+E2+P4+NKB和OVX+Oil+NKB组大鼠下丘脑Tac-2、GnRH、Kiss-1的基因表达量显著高于E2、E2+P4和Oil组（P<0.05）。OVX+E2+NKB、OVX+E2+P4+NKB和OVX+Oil+NKB组大鼠下丘脑ERα的基因表达量显著高于E2、E2+P4和Oil。且ERα与Tac-2和GnRH基因表达呈正相关，而Kiss-1与ERα基因呈负相关。（6）Oil组大鼠血清中NKB的含量显著高于OVX+E2和OVX+Oil组（P<0.05）。OVX+E2+P4+NKB、OVX+E2+NKB和E2+P4组血清中NKB的含量差异不显著（P>0.05）。 E2和OVX+Oil+NKB组大鼠血清中的NKB含量最低（P<0.05）。（7）E2+P4和E2组大鼠外周血液中的雌二醇浓度显著高于其他各组（P<0.05），E2+P4、E2、OVX+E2+P4和Oil组大鼠血液中的孕酮含量最高（P<0.05）。（8）NKB与雌二醇的相关性系数值为-0.81423，呈高度负相关；NKB与孕酮的相关性系数值为-0.478593，呈低度负相关。 根据以上结果得出结论：（1）雌二醇和NKB能够诱导大鼠初情期启动时间提前。（2）NKB主要分布在大鼠下丘脑的弓状核、室旁核和腹内侧核，腺垂体以及卵巢的黄体细胞、颗粒细胞、卵泡膜和间质细胞上；Kisspeptin主要分布在大鼠下丘脑的弓状核、室旁核和视前区；GnRH主要分布在大鼠下丘脑的正中隆起、弓状核和视前区。且NKB、Kisspeptin在GnRH分布的关键区域弓状核高度表达，提示NKB、Kisspeptin和GnRH之间存在一定的调控关系，且弓状核是NKB和Kisspeptin调控生殖的关键部位。（3）性腺激素抑制大鼠下丘脑NKB、GnRH和Kisspeptin蛋白及其基因的表达。（4）下丘脑NKB神经元介导ERα对生殖的调控作用。（5）NKB在外周生殖器官卵巢上的广泛分布，说明NKB可能直接调控卵巢的功能。