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球孢白僵菌(Beauveria bassiana)是一种昆虫病原性真菌,由于其高效,靶标特异和无残留等优点,常被用作生物防治剂。但是,由于B.bassiana对非生物胁迫的敏感性高,并且在自然条件下表现出低毒力,所以它在实际应用中受到了很大的阻碍。室温常压等离子体诱变技术(Atmospheric Room Temperature Plasma,ARTP)技术具有诱变温度低、错配位点种类丰富、突变快等优点。作为一种高效率的微生物突变体库诱变工具,在微生物育种的过程中作用十分显著。为了高效地获得具有高生治潜能的球孢白僵菌菌株,本研究使用了流式细胞荧光分析筛选技术(Fluorescence Activated Cell Sorting,FACS)对室温常压等离子体诱变的球孢白僵菌突变体库进行筛选,并获得高致病力球孢白僵菌菌株。主要研究内容和结果如下:(1)比较ARTP诱变技术和紫外线诱变技术对球孢白僵菌的诱变效率。诱变球孢白僵菌分生孢子所需时间分别为90s和30min。(2)对球孢白僵菌进行ARTP诱变,获得了包含8000个突变体的突变库。然后根据突变株分生孢子的前向散射(FSC)信号选择了6株芽生孢子显著大于野生型的候选突变株。(3)对候选突变株进行孢子产量、萌发率、耐热性和毒力等特性的评估。结果显示,在六株候选突变体中,候选突变体B2,B3和B6的FSC读数分别比野生型菌株显著高25.1%,12.2%和37.4%。与野生型相比,B1对40℃热胁迫的耐受性低29.8%;B2和B3的孢子产量分别低25.3%和25.9%;B4的萌发能力和芽生孢子产量分别低23.3和30.5;B5的孢子产量低39.3%。筛选出突变株B6为具备高生防潜力的球孢白僵菌菌株。与野生型菌株相比,突变株B6的FSC读数比野生型高37.4%,半致死时间减小32.6%,侵染毒力显著性高于野生型菌株。在相同培养条件下,B6还表现出了比野生型高13.5%的萌发率和12.1%的芽生孢子产量。除此之外,B6的耐热性和分生孢子产量与野生型无明显差异。(4)本研究还对B6和野生型感染的大蜡螟(Galleria mellonella)幼虫转录组进行比较。分析表明,在B6感染3天后的大蜡螟幼虫中,共检测到1491个共表达基因表现出明显的表达变化(|FC|≥2,Q≤0.001),其中包括622个上调基因和869个下调基因。35个GO条目中有25个的下调基因多于上调基因,这表明差异基因的大部分转录活性受高毒力菌株的感染抑制,比如脂肪酸合成等代谢过程。但是大蜡螟幼虫的免疫反应以及蛋白质的消化和吸收进程被高度激活。本论文证实了利用ARTP和FACS的相互结合应用来筛选具有高毒力球孢白僵菌菌株是切实可行的。通过对侵染高毒力菌株的转录组进行分析,促进了对昆虫-病原体相互作用的理解,从转录组角度提出了提高昆虫病原性真菌防治效率的新策略。