【摘 要】
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在hGMCSF结构与功能研究基础之上,通过应用PCR介导的基因缺失与突变和基因重组等技术,构建了表达hGMCSF(7-127)的三种表达载体pBV220/GM-TGA,pBV220/GM-TAA和pBV220/GM-3UTR.
【出 处】
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北京医科大学 北京大学医学部 北京大学
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在hGMCSF结构与功能研究基础之上,通过应用PCR介导的基因缺失与突变和基因重组等技术,构建了表达hGMCSF(7-127)的三种表达载体pBV220/GM-TGA,pBV220/GM-TAA和pBV220/GM-3UTR.在三种表达载体内,hGMCSF cDNA的5端均缺失6个氨基酸,3端则分别为天然终止密码TGA、突变终止密码TAA和TGA加3UTR.SDS-PAGE电泳表明三种载体表达rhGMCSF(7-127)水平分别为21%,18.8%和24%.经过分析hGMCSF(7-127)-3UTRmRNA的二级结构,表明3UTR在终止密码TGA附近能形成两个茎-环结构,该结构能够阻止原核细胞内3-5外切核酸酶降解mRNA的作用,从而能增加其上游mRNA的稳定性与表达量.
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