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背景和目的：目前重组腺相关病毒载体（rAAV）的应用已经进入临床研究的阶段，但是对于一般大动物的临床前研究或试验，载体颗粒单批产量要求至少要达到1015VP(viral particle)，这一用药剂量对于现行的胞内病毒制备是一个很大的挑战。而为了达到临床研究的标准，必须加大成本的投入。面对这一困境和市场需求，本研究提出了用蛋白质元件在细胞外装配病毒的构想：即通过基因工程的手段制备病毒组装所需的各种蛋白和DNA元件，利用自组装与纳米技术在胞外先组装成病毒样颗粒AAV-VLP（Virus-like particle），再衣壳化形成具有活性的病毒。本论文主要任务就是AAV2组装蛋白元件的制备，包括衣壳蛋白VP2和VP3，以及组装激活蛋白AAP。研究内容：首先构建毕赤酵母表达系统的工程菌GS115-VP2和GS115-VP3，筛选出高表达菌种后，利用5L发酵罐进行中试规模诱导表达VP2和VP3，使用SDS-PAGE，western blot以及质谱检测等方法进行鉴定，经过疏水柱层析，G-25脱盐以及肝素亲和等层析柱的纯化获得了AAV2自组装元件VP2蛋白和VP3蛋白。其次，使用大肠杆菌表达系统构建工程表达菌BL21-VP3和BL21-AAP，其中VP3蛋白以包涵体的形式存在，通过包涵体洗涤，溶解，并且Ni层析柱纯化复性等步骤获得了可溶的VP3蛋白，可用于多克隆抗体的制备。AAP蛋白在诱导表达之后，通过疏水柱，G-25脱盐，CM柱分离纯化，获得纯化的AAP蛋白。研究结论：与传统腺相关病毒制备工艺不同，本文试图通过构建一系列工程表达菌，诱导表达并分离纯化出了可用于AAV2胞外自组装研究的所有蛋白元件，为后续的胞外制备腺相关病毒奠定了物质基础。