【摘 要】
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该文在国内外首次用基因工程方法制备抗HBsAg单链抗体与白细胞介素2融合蛋白.该实验通过重叠PCR,将该室克隆的抗HBsAg单链抗体与IL-2重组,构建抗体融合蛋白基因ScFv-IL2,插入
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该文在国内外首次用基因工程方法制备抗HBsAg单链抗体与白细胞介素2融合蛋白.该实验通过重叠PCR,将该室克隆的抗HBsAg单链抗体与IL-2重组,构建抗体融合蛋白基因ScFv-IL2,插入克隆载体pGEM7zf(+),测序鉴定后,将抗体融合蛋白基因亚克隆到表达载体pQE40中,转化大肠杆菌M15[pREP4],获得工程菌M15[pQE-ScFv-IL2].该工程菌经IPTG诱导后,SDS-PAGE可见分子量为43KDa的重组蛋白,表达量可达19﹪,进一步分析表明,该重组蛋白在胞质中形成包涵体.由于抗体融合蛋白基因在插入pQE40时,与载体上的6×His标签共阅读框融合,因此,可用Ni离子金属螯合亲合层析对包涵体进行第一步纯化和固相复性,所得目的蛋白峰再经离子交换层析,纯度达94﹪.纯化产物的活性鉴定结果表明,重组抗体融合蛋白既能与HBsAg特异性结合,也能刺激CTLL-2细胞增殖,说明获得的抗体融合蛋白兼具亲本分子的双特异性,这为慢性乙型肝炎及相关疾病的导向治疗研究打下了良好基础.
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