【摘 要】
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该研究采用豇豆褪绿斑驳病毒作为研究对象.豇豆褪绿斑驳病毒是一个三分体正链RNA球形病毒.其基因组由RNA1(3.2kb)、RNA2(2.9kb)和RNA3(2.1kb)3条单链RNA所组成,采用RNA1、RNA2和RN
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该研究采用豇豆褪绿斑驳病毒作为研究对象.豇豆褪绿斑驳病毒是一个三分体正链RNA球形病毒.其基因组由RNA1(3.2kb)、RNA2(2.9kb)和RNA3(2.1kb)3条单链RNA所组成,采用RNA1、RNA2和RNA3接种植物合会产生一条编码外壳蛋白的亚基因组RNA4.RNA1和RNA2都是单顺反子,分别编码病毒复制所需的109kD和94kD蛋白,RNA3是双顺反子,编码负责细胞间运动的32kD蛋白(3a蛋白)及21kD外壳蛋白.病毒的复制不需要3a蛋白和外壳蛋白,但在病毒的系统侵染中需要这两种蛋白的参与,因此,豇豆褪绿斑驳病毒RNA3是研究RNA病毒重组的理想材料.该研究首先采用PCR点突变的方法,将连接于质粒pBluescript(KS+/-)上的CCMV RNA3的cDNA克隆进行点突变,并获得TP7、TP8和AG1三种RNA3的突变体.进一步以TP7+TP8、TP7+AG1和TP8+AG1混合接种植析中提取的病毒RNA为模拟,进行RT-PCR,将产物克隆于质粒Bluescripts(KS+/-)后,酶分析了来源于不同接种植株522个CCMV-RNA3 cDNA克隆.为了将真实病毒重组子克隆与可能的点突变体克隆区别开来,对酶切分析发现的可能的病毒重组子克隆(带有双标记点和没有标记点的克隆)进行部分DNA序列测定.
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