【摘 要】
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肠道内细菌种类繁多,定植或过路菌群的改变对人体的生长发育、免疫功能、营养、药物代谢、发病机制及健康等起着重要的作用,对肠道菌进行定量分型检测具有重要的科学和临床意
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肠道内细菌种类繁多,定植或过路菌群的改变对人体的生长发育、免疫功能、营养、药物代谢、发病机制及健康等起着重要的作用,对肠道菌进行定量分型检测具有重要的科学和临床意义。目前国内外已建立了若干针对肠道菌rRNA及其基因的分型方法,但这些方法普遍存在着结果不稳定,操作难度大,通量小,无法定量分析等各类弱点,妨碍了普通研究机构和临床单位对肠道菌群开展有效的科研和检测。本研究结合竞争性PCR(competitive PCR, cPCR)和连接酶检测反应(ligase detection reaction, LDR)技术,选取2种肠道有益菌双歧杆菌和乳酸杆菌,3种条件致病菌肠球菌、肠杆菌、真杆菌作为研究对象,针对16s rDNA设计引物探针,建立了肠道菌多重定量分型方案。通过制备得各菌属的标准质粒DNA,模拟混合模板的多重检测,考察了本方案定量分型的可行性。并制作了标准曲线,用于分析样本中各菌属模板量的关系。同时设计了两条包含通用引物结合序列的内参DNA,用于从PCR开始对整个检测过程的质控,并根据加入内参的已知量,得到一个对样本中模板量的参考。根据上述建立的技术体系,由标准DNA混合模板经LDR检出的各菌属信号值之间与其初始浓度之间有良好的线性关系。由于样本中菌属间以及样本间同种菌属量上存在数量级的差异,故样本中低浓度的模板改由LCR探针检出信号,但此时信号值在一定程度上反应了初始模板量。82份样本中,检出率由高到低排列为：干酪乳杆菌>肠杆菌=嗜酸乳杆菌>双歧杆菌>真杆菌>肠球菌。其中,肠杆菌和双歧杆菌含量最高,真杆菌次之,乳杆菌相对较低,而肠球菌为最低。将菌属间相对含量分布按性别、年龄做非参检验分析,均没有显著性差异。表明在健康人群中,肠道菌群含量相对保持稳定。
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