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目的：分离、培养U251胶质瘤干细胞,并应用普通U251胶质瘤细胞和U251胶质瘤干细胞分别移植小鼠体内,比较该两种细胞系成瘤率；在免疫放疗技术的基础上,应用CD133抗体进行标记Na131i,以CD133抗原为靶向,对恶性胶质瘤体内进行靶向放疗研究,为临床上进一步治疗恶性胶质瘤提供客观的实验依据。方法：1、培养普通的U251细胞,并在无血清的条件下加入EGF、bFGF、LIF、B27因子,培养获得U251干细胞,并进行CD133免疫组化鉴定。2、分别制备浓度为3.5×107/mL的普通U251和U251干细胞单细胞悬液,并分别种植于BALB/c Nude小鼠左右臀部皮下,比较两种细胞系种植于皮下的成瘤率以及生长速度。通过HE染色、CD133因子免疫组化,比较两种细胞系成瘤的病理学形态以及表达CD133抗原的差异。3、采用NBS(N-溴代丁二酰亚胺)标记方法,取200μ1含400μg的CD133抗体加入0.1MpH7.4磷酸缓冲溶液1mL混匀,再向其中加入浓度为10GBq/mL Na131I溶液1.4mL,并用人血白蛋白进行终止反应,最后纯化、过滤,获得131I-CD133抗体偶合物。4、取建立荷瘤模型成功的荷瘤小鼠54只,随机分为A、B、C3组。A组,用标记好的131I-CD133抗体偶合物进行尾静脉注射；B组,用相同体积同等碘活性量未标记的Na131i溶液进行尾静脉注射；C组,用同等量生理盐水进行尾静脉注射。5、A、B、C3组分别于注药后24h、48h、72h用丙泊酚腹腔注射麻醉后进行双探头符合线路SPECT碘跟踪成像以及CT断层扫描,活性碘跟踪成像以及三维重建。6、A、B、C3组每组分别于24h、72h处死3只收集肺、肝、肾、脾、脑和肿瘤组织,以及48h和半衰期(8天)分别处死6只收集肺、肝、肾、脾、脑和肿瘤组织,各个器官用生理盐水冲洗后滤纸吸清组织表面水分,用放射性活度计检测组织核素活度并称重组织,计算各个组织器官每克摄取核素的量。以及48h和半衰期处死6只中,另外收集肿瘤组织,备做免疫组化检查。7、在48h、半衰期取材的每组6个肿瘤标本中放在10%甲醛中固定24h,脱水、包埋做成蜡块并进行切片,按常规的方法做CD133免疫组化检测。每组每个标本做出免疫组化后,然后应用Image-pro plus软件分析灰度值进行统计分析。结果：1、在无血清培养基中加入EGF、bFGF、B27、LIF因子培养普通U251胶质瘤细胞,可以获得U251胶质瘤干细胞,胶质瘤干细胞具有悬浮克隆球生长的特点。2、通过无血清培养基并加有营养因子后培养获得U251干细胞,并进行免疫组化鉴定,图中显示细胞克隆球中发现有大量的CD133抗原表达。3、荷瘤小鼠种植U251干细胞后4-5天开始见皮下有微小组织块生长,于3周半左右种植部位可以见到1.5×1.51×1cm3大小肿瘤组织,肿瘤的生长速度于肿瘤细胞移植后2周后生长速度最快。与普通U251种植小鼠相比,生长速度更快、恶性程度更高,更适合应用于胶质瘤的相关研究。4、柱层析法分离、纯化测定的标记产物131I-CD133抗体标记率为75.8%。5、A、B、C3个实验组于24h、48h、72h进行碘SPECT扫描跟踪成像。24h扫描显示, C组,没有发现有任何活性碘的成像； B组,在甲状腺发现有强烈的活性碘成像,在肿瘤组织、膀胱等其他各个器官有微弱的活性碘显像； A组,发现在甲状腺以及肿瘤组织中都有强的活性碘显像,膀胱等其他器官也均有微弱的活性碘分布。48h扫描显示,C组,依然没有任何活性碘的存在；B组,在甲状腺始终有强烈的活性碘,而在肿瘤组织及其他器官活性碘明显极少量存留；A组,在肿瘤组织以及甲状腺依然发现有较强的活性碘存留。72h扫描显示,C组没有任何的活性碘显像；B组,甲状腺中仍然见有强的活性碘存留,而肿瘤组织中活性碘极其微弱；A组,在甲状腺和肿瘤组织中仍见有强的活性碘显像。Na131I、131I-CD133抗体耦合物两组在甲状腺、肺、肝、肾、脾、血液、脑和肿瘤组织中均见有活性碘分布。6、靶向放疗后CD133免疫组化检测,显微镜下观察、并应用Image-pro plus软件进行灰度值分析显示,C组,在整个时间段CD133抗原的表达量基本没什么变化； B组,在整个时间段稍有所减少,但是与空白对照组相比,没有统计学意义； A组,在48h小时内较前面两组有所减少,与前面两组相比没有统计学意义,但是在半衰期后有统计学差异(P<0.05)。结论：1、普通U251胶质瘤细胞,在无血清条件下加入EGF、bFGF、LIF、B27因子可培养得U251干细胞。2、U251恶性胶质瘤干细胞比普通U251胶质瘤细胞更具有高生长率、高侵袭性、高表达CD133抗原；应用U251胶质瘤干细胞建立肿瘤模型更优于普通U251胶质瘤细胞。3、CD133抗体标记131I实验组中,放疗效果要比没有标记的131I实验组效果显著。