B细胞受体复合物的表达纯化

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体液免疫是人类适应性免疫最关键的部分之一,而B细胞在其中发挥着不可替代的作用。B细胞的细胞膜表面表达着B细胞受体(B cell receptor,BCR),是一种能够特异性地识别并结合抗原的免疫膜蛋白受体。BCR的本质是膜免疫球蛋白(membrane immunoglobulin,m Ig),它通常与一种参与信号传递的异二聚体分子CD79A/B复合物共表达,二者共表达的产物称之为B细胞受体复合物(即BCR复合物)。BCR的类型多种多样,其中在未激活的初始B细胞中表达的类型是Ig M型和Ig D型,但是在复合物中,CD79A/B总是相同的。随着膜蛋白纯化技术、膜蛋白结晶技术和冷冻电镜技术的发展,人们解析了多种常见的膜蛋白受体。而截至目前,关于BCR复合物结构方面的研究少之又少,如何通过体外表达纯化获得BCR复合物、其结构是不是正如前人研究的那样以及m Ig和CD79A/B之间的信号转导到底如何进行等问题仍未得到解决。本课题通过哺乳动物细胞表达系统——HEK293F细胞系表达纯化了λIg M型BCR复合物和κIg D型BCR复合物。采用膜蛋白常用的纯化方法,并利用快速蛋白液相色谱(Fast protein liquid chromatography,FPLC)结合分子筛进行层析以获取质量更高的蛋白。由于起初的表达纯化实验所获取的蛋白含量及质量不高,接下来展开了去垢剂的筛选实验,同时进行了针对载体的改造,以探索BCR复合物合适的表达和纯化方法。通过对21种去垢剂的筛选,最终针对λIg M型BCR复合物筛选出了一种较为合适的去垢剂——L360S。同时,通过对载体的改造,提升了CD79A/B的表达量。最后,我们尝试了一些新的方法对κIg D型BCR复合物进行表达纯化,取得了良好的效果。综上所述,去垢剂的筛选和对载体的改造一定程度上改善了BCR复合物表达和纯化的效果,为将来解析其结构打下了良好的基础。
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