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猪流行性腹泻病毒(Porcine Epidemic Diahorrea Virus,PEDV)引起的猪流行性腹泻(Porcine Epidemic Diahorrea, PED)是严重危害我国养猪业的肠道传染病。目前,还没有有效的治疗措施及治疗药物能对PED进行治疗。控制和预防PED的主要途径之一是疫苗接种,但有研究表明有些猪场在接种该疫苗后,猪群还是被PEDV感染致病并大量传播。究其原因可能是PEDV不同毒株之前发生了比较大的变异,致使疫苗免疫失效。因此,找出更加有效地防治PED的手段具有重要意义。在生物机体内miRNA是一类非编码的小RNA。miRNA作用非常广泛,能调控细胞的生长和分化以及新陈代谢和凋亡等重要的生命过程。随着研究的深入,发现具有抗病毒功能的miRNA越来越多,且miRNA发挥作用的区域可直接是病毒基因保守序列,所以miRNA对同一病毒的不同毒株都有抗病毒作用。为研究猪流行性腹泻病毒对PK-15细胞miRNA表达谱的影响,将PEDV感染PK-15细胞后,提取总RNA,进行高通量测序,构建感染PEDV的PK-15细胞以及未感染的细胞的miRNA表达谱,并进行差异性分析。试验结果发现,有214个1niRNA显著性差异表达,其中175个miRNA表达上调,39个miRNA表达下调。选取10个显著性差异表达的miRNA通过RT-qPCR进行验证,结果显示RT-qPCR验证的各miRNA的表达趋势与高通量测序结果一致。为研究差异表达的miRNA对病毒增殖的作用,结合靶基因预测、miRNA表达谱以及己报道与免疫有关的miRNA,本试验选取ssc-let-7f以及其它6个miRNA合成miRNA minics转染到PK-15细胞中,并接种PEDV,取样进行荧光定量PCR,观察转染miRNA后PEDV病毒含量的变化,验证各miRNA对病毒增殖的作用。其结果显示,ssc-let-7f在12h、24h及36h的时候均对PEDV的增殖有明显的抑制作用。说明ssc-let-7f对PEDV的体外感染有一定的抑制作用。本试验是首次对PEDV感染猪肾细胞PK-15后miRNA表达谱的进行研究,为进一步阐明miRNA对宿主先天性免疫系统的分子调控机制提供依据,对PED的防治提供新思路,更为进一步揭示miRNA的抗病毒机制,miRNA与PEDV之间复杂的关系以及深入研究PEDV的致病机制提供理论参考依据。