论文部分内容阅读
Himetobi P病毒(Himetobi P virus，HiPV)是一种感染稻飞虱的单链RNA病毒，隶属小RNA病毒目(Picornavivales)双顺反子病毒科(Dicistroviridae)蟋蟀麻痹病毒属(Cripavirus)的颗粒体病毒，1992年于灰飞虱种群中首次被分离出来。而对于该病毒在褐飞虱上的携带情况，感染褐飞虱的途径及对褐飞虱生长发育等的影响尚不清楚。本研究测定了稻飞虱不同地理种群体内携带HiPV的情况，HiPV在褐飞虱体内的组织定位及其在褐飞虱体内的增殖动态，并利用RNA干扰的方法研究了HiPV对褐飞虱生长发育的影响。获得以下结果：（1）稻飞虱不同地理种群内HiPV的检测。对10个地理种群的褐飞虱、5个地理种群的白背飞虱、1个地理种群的灰飞虱进行HiPV检测后发现，3种稻飞虱16个地理种群均携带HiPV。通过比对克隆的16个地理种群稻飞虱HiPV衣壳蛋白片段的序列，建立了供试16个地理种群稻飞虱中HiPV的分子进化树，发现其聚类与宿主种类及地理来源无明显的相关性。（2）褐飞虱体内HiPV的组织定位。利用大肠杆菌原核表达系统，成功构建了pGEX-6P-1-HiPV表达载体，通过优化表达条件、纯化表达产物及多克隆抗体制备的方法，获得了HiPV病毒的多克隆抗体。利用HiPV病毒抗体对褐飞虱的卵巢、精巢、中肠、马氏管、后肠、唾液腺和脂肪体进行免疫组化检测，并采用实时荧光定量PCR对这些组织中HiPV的相对含量进行了检测，发现HiPV主要定位于褐飞虱中肠末端、马氏管及后肠；精巢、唾液腺及脂肪体中也有分布；卵巢中含量最少。（3）褐飞虱体内HiPV的增殖动态。利用实时荧光定量PCR检测了不同发育阶段及不同性别褐飞虱体内HiPV的相对含量，发现HiPV相对含量随褐飞虱龄期增加而增加，其中在成虫期骤增且含量达到最大。此外，褐飞虱雄虫成虫体内HiPV含量高于雌虫。（4）HiPV对褐飞虱的生长发育的影响。通过RNA干扰的方法，研究了HiPV对褐飞虱及其子代生殖发育的影响。结果表明，对褐飞虱进行HiPV的RNA干扰后，褐飞虱发育历期无变化，且其死亡率与对照间无统计学意义的差异。其中3龄若虫对HiPV的干扰效果反应最明显，而4龄若虫干扰效果最持久，5龄若虫干扰效果不明显。此外，RNA干扰后褐飞虱子一代卵期至3龄若虫期体内HiPV相对含量呈减少趋势，与对照组的趋势相反。综上所述，褐飞虱、白背飞虱、灰飞虱三种稻飞虱自然种群体内均含有HiPV，其中在褐飞虱体内不同组织中含量不同，以中肠末端中含量最高，而在卵巢中含量最低；同时，HiPV还可在褐飞虱体内增殖，但对褐飞虱正常的生长发育无影响。该研究将为进一步开展HiPV与褐飞虱间的相互关系及对传播水稻病毒的影响研究提供参考。