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目的:构建分化抑制因子1(Id1)重组腺病毒(Rad),检测RAd-Id1在细胞学水平和小鼠体内的表达水平及其引起的相应变化,初步研究肝癌细胞中Id1的表达对乙型肝炎病毒复制水平的影响。方法:先将Id1基因克隆到pAdtrack-TO4上,再重组到Ad Easy-1腺病毒骨架载体中;在HEK293细胞中采用Tong-Chuan He[1]等方法将腺病毒重组质粒pAdEasy-Id1进行包装以获得Id1重组腺病毒(RAd-Id1),通过绿色荧光蛋白标记法测定腺病毒滴度;通过qRT-PCR和Western blot实验验证RAd-Id1感染的Hep G2细胞中Id1的过表达效果;用MTS比色法检测RAd-Id1对HepG2细胞增殖的影响;通过尾静脉注射RAd-Id1的感染方式建立肝组织中过表达Id1的小鼠动物模型,病毒载量梯度实验分PBS空白组、RAd-GFP对照组及RAd-Id1实验组(n=5/组)以测定RAd-Id1感染小鼠的适合载量;病毒感染时间梯度实验每5天检测一次为一组,共7组(n=5/组)以测定感染小鼠的适合时间;通过Western blot检测小鼠肝组织中Id1的过表达效果及甲胎蛋白(AFP)和癌胚抗原(CEA)的表达水平,再采用ELISA检测小鼠血清中Id1的免疫原性及AFP和CEA的表达情况;RAd-Id1感染稳定表达HBV的肝癌细胞系HepG2.2.15,观察HBV复制水平的变化。结果:成功构建Id1-p Adtrack-TO4和Id1-p AdEasy-1质粒,并包装获得RAd-Id1,测得其滴度为1.5×1011GFU/mL;RAd-Id1感染HepG2细胞48 h和72 h后,Id1的转录和蛋白水平均明显升高(P<0.01);96 h时RAd-Id1实验组的MTS检测值较PBS空白组和RAd-GFP对照组明显升高;WB结果显示:在RAd-Id1感染的小鼠肝组织中,Id1、AFP和CEA蛋白水平较PBS空白组和RAd-GFP对照组升高;Hep G2.2.15细胞在感染RAd-Id1后HBV的复制(HBV DNA)和转录(HBV pgRNA和HBc蛋白)水平降低。结论:成功构建了RAd-Id1及其介导的小鼠动物模型;RAd-Id1可作为细胞水平上Id1对肝癌和HBV作用机制研究的载体工具;AFP和CEA的升高提示Id1可能参与诱导AFP和CEA的表达;Id1可能参与抑制HBV复制和表达水平的过程。