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目的：
研究发现肿瘤抑制基因KISS-1及其蛋白肽Kisspeptin-54参与调控滋养细胞的浸润行为。肿瘤细胞的浸润行为与滋养细胞的极为相似,研究发现加入外源性mestastin(Kisspeptin-54)可导致肿瘤细胞间局部粘附里增加,迁移和浸润能力下降,但此种抑制效应可以被Rho激酶抑制剂Y-27632所抑制。Y-27632是选择性ROCKⅡ抑制剂,ROCKⅡ是Rho/ROCK信号通路的下游靶蛋白。拟研究Kisspeptin-54是否可以通过Rho/ROCK信号通路抑制滋养细胞的浸润。
方法：
1、复苏、培养JEG-3细胞系细胞至对数生长期,用不同浓度Kisspeptin-54(10nmol/L,100nmol/L,1000nmol/L),Kisspeptin-54抗体(10nmol/L,100nmol/L,1000nmol/L),Rho/ROCK信号通路抑制剂Y-27632(5umol/L,10umol/L,15umol/L,20umol/L,50umol/L)处理细胞24h,并且设立空白对照组及盐水对照组。
2、WesternBlot法检测MMP-9,ERM,ROCKⅡ,Kisspeptin-54的表达。
3、统计学方法:应用SPSS16.0软件进行统计分析,以均数士标准差表示定量资料数据,组间比较采用单因素方差分析(ANOVA),认为P＜0.05有统计学意义。
结果：
1、加入Kisspeptin-54对ROCKⅡ、MMP-9、ERM表达的影响:Kisspeptin-54能上调ROCKⅡ的表达,下调MMP-9、ERM的表达,与对照组相比有显著统计学差异(P＜0.05),且随着Kisspeptin-54浓度的增加,ROCKⅡ表达增加,MMP-9、ERM的表达下降。
2、加入Kisspeptin-54抗体对Rho/ROCK信号通路中ROCKⅡ表达的影响:Kisspeptin-54抗体可以下调ROCKⅡ的表达,与对照组相比有显著统计学差异(P＜0.05),且随着Kisspeptin-54抗体浓度的增加,ROCKⅡ表达下降。
3、加入Kisspeptin-54抗体对浸润相关因子表达的影响:Kisspeptin-54抗体可以上调MMP-9,ERM的表达,与对照组相比有显著统计学差异(P＜0.05),且随着Kisspeptin-54抗体浓度的增加,MMP-9,ERM表达增加,Kisspeptin-54表达下降。
4、加入Y-27632后对ROCKⅡ、MMP-9、ERM表达的影响:加入Y-27632后,ROCKⅡ、MMP-9、ERM的表达均下降,与对照组相比有显著统计学差异(P＜0.05),且随着Y-27632浓度的增加,抑制作用越强。
5、加入Y-27632后对Kisspeptin-54的影响:加入Y-27632后,Kisspeptin-54表达不变,与对照组相比无显著统计学差异(P＞0.05)。
结论：
Kisspeptin-54可抑制JEG-3细胞滋养细胞的浸润,Rho/ROCK信号通路参与抑制JEG-3滋养细胞的浸润,Kisspeptin-54可以通过至少部分通过Rho/ROCK信号通路抑制滋养细胞浸润。