论文部分内容阅读
二噁英是一类常见的持久性有机污染物，广泛存在于环境中。毒性作用剂量极低并且易于在生物体内富集，对环境和人体健康都具有很大的危害。环境中的二噁英组分复杂，对分析技术的特异性和灵敏度要求都非常高。 国际上公认的检测二噁英的HRGC/HRMS标准方法需要复杂的前处理，且费用昂贵，而应用生物检测手段检测二噁英类污染物有很大的优势。本研究主要利用二噁英类化合物进入生物体内后，作为芳香烃受体(Ary hydrocarbon receptor，AhR)的配体，促进AhR入核与CYP1A基因上游启动子区域的二噁英物质响应元件(dioxin-responsive element，DRE)结合，从而诱导其表达这一毒性机制，将多个DRE融合进CYP1A的启动子中，构建了一种受DRE调控，以萤火虫荧光素酶为报告基因的表达质粒，并稳定转染到HepG2细胞中。通过检测萤火虫荧光素酶的表达水平即可获知二噁英类物质的含量。以TCDD作为二噁英类化合物的典型代表，发现该方法检测二噁英具有较宽的线性范围，其线性范围为0.5ng/L到100ng/L(R2=0.96375);检测限为0.5ng/L，EC50为1ng/L。目前商品化的CALUX生物法检测二噁英的检测限为0.77ng/L，线性范围为0.77ng/L-32.2ng/L，EC50为6.4ng/L，并且CALUX是利用MMTV启动子，会受到雌激素类物质的影响。因此我们的方法在特异性与灵敏度上都优于CALUX方法，并且线性范围更宽。 我们还利用该方法检测了48种新型农药与除草剂，发现其中大部分都能引起萤火虫荧光蛋白酶的表达，说明其有可能对细胞产生类似二噁英类化合物的毒性效应。噻唑菌胺，种菌唑，啶酰菌胺，双氯氰菌胺，苯磺菌胺，嘧菌胺等6种化合物对萤火虫荧光蛋白酶的诱导呈现剂量依赖性，表明它们很可能是AhR的配体。 综上所述，本研究结果表明，我们构建的检测二噁英的细胞系能够简单，快速，经济的检测二噁英，并且对验证其他物质是否具有二噁英类化合物的毒性效应有一定的意义。