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本课题以视网膜S抗原免疫敏感动物Lewis大鼠,建立稳定的EAU动物模型;在此基础上探讨ICOS在EAU模型中的基因、蛋白水平的表达,并深入探讨ICOS与活化CD4 T细胞的关系,进一步揭示ICOS在EAU中的意义。
第一部分S抗原的提取和EAU的诱导
目的:提取牛视网膜S抗原,诱导稳定的EAU动物模型,为进一步的研究奠定基础。
结论:采用杨培增教授的方法,通过离子交换层析可从视网膜中迅速获得高度纯化的S抗原,为下一步实验提供了充足的免疫原。使用我们自己提纯的S抗原,沿用前人的方法通过使用S抗原混合福氏完全佐剂的混合乳剂免疫Lewis大鼠,成功地诱导出EAU模型。该模型临床表现明显,所使用的动物品系纯正,对S抗原的反应敏感,模型诱导的成功率高,为下一步实验的进行奠定了良好的基础。
第二部分EAU中ICOS表达的实验研究
目的:探讨ICOS在EAU大鼠的视网膜、引流淋巴结、脾脏中基因及蛋白水平的表达,并分析ICOS与CD4+T细胞的关系。
结论:ICOS参与EAU的发生,发展,高峰,消退的全过程,并且ICOS阳性细胞主要是CD4+T细胞。
第三部分EAU中ICOS+细胞的功能研究
目的:探讨ICOS与EAU各时间点活化CD4+T细胞的关系,并且研究高峰期ICOS阳性细胞分泌细胞因子的功能。
结论:ICOS主要表达于活化CD4+T细胞上,ICOS阳性细胞分泌大量的IFN-γ,是EAU中主要的效应细胞。