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绿色荧光蛋白(GFP)是广泛应用于细胞生物学和分子生物学的重要蛋白。尽管GFP作为生物示踪分子可以方便检测特定蛋白在细胞内的定位,但目前为止尚无应用于细胞内代谢产物的直接检测的报道。
在本论文中,与华东理工大学杨弋教授合作,通过环化处理GFP并对蛋白序列进行截短,得到了一个保留绿色荧光特性的突变体tcpGFP。通过晶体结构的解析,发现该蛋白具有预期的表面口袋结构。进一步检测了tcpGFP聚体蛋白的二级结构,认为可能是错误折叠所致。与SUMO的融合表达无法有效提高tcpGFP的正确折叠效率。通过定点突变减少或消除二聚体分子间的相互作用,也无助于减少聚体蛋白的形成。最近,通过设计二硫键修饰的突变体期望改善蛋白的折叠行为,已经得到了能明显提高单体比例的双突变体GFP。