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背景灰树花多糖具有多种生物活性作用,其中免疫调节活性是其重要的生物活性之一,目前国内外已有大量关于灰树花多糖对动物疾病模型体内免疫调节功能影响的动物实验研究,但大多实验在方法方面存在一定的局限性,如部分实验未对动物进行随机分组,少数实施了随机分组的实验亦未重视对随机序列的隐藏。此外,对实验动物进行随机化安置、对饲养者或研究者或结果评估者实施盲法,以及随机选择动物用于结果评估等影响一个实验方法质量的重要措施和步骤均存在或多或少的缺失,这些均可能会影响其实验结论的真实性。目的1.通过对现有的灰树花多糖调节动物疾病模型体内免疫功能的研究进行全面检索、质量评价及数据合成,了解该领域的研究现状及存在问题,为后续开展相关实验研究提供可靠的循证医学证据。2.通过严谨设计和科学实施的动物实验研究方法,采用灰树花多糖干预处理构建成功的小鼠肝癌疾病模型,检测荷瘤鼠体内相关的免疫学指标,验证灰树花多糖对小鼠肝癌模型体内免疫调节作用的影响。方法1.通过系统评价的方法,探讨灰树花多糖对动物疾病模型体内免疫调节功能的影响。2.采用动物体内实验研究的方法,选用BALB/c小鼠,按照随机分配的原则将小鼠分为三组,每组12只,灰树花多糖组(灰树花多糖灌胃给药)、阴性对照组(生理盐水灌胃)和阳性对照组(5氟尿嘧啶腹腔注射给药),皮下接种鼠源肝癌H22细胞,24小时后各组给予相应药物处理。给药14天后,处死小鼠,采用流式细胞术检测荷瘤鼠免疫细胞的增殖活性(脾T、B细胞),酶联免疫吸附法检测荷瘤鼠的外周血中免疫因子(INF-γ、IL-12和TNF-α)的分泌量,验证灰树花多糖对小鼠肝癌模型体内免疫调节作用的影响。结果1.Meta分析结果显示:共纳入21篇动物实验研究,(1)脾CD4~+T细胞百分比:灰树花多糖组CD4~+T细胞百分比[MD=1.89,95%CI(0.94,2.83),P<0.0001]高于阴性对照组,差异有统计学意义。(2)脾CD8~+T细胞百分比:灰树花多糖组CD8~+T细胞百分比[MD=8.46,95%CI(5.93,11.00),P<0.0001]高于阴性对照组,两组间差异有统计学意义。(3)脾CD19~+B细胞百分比:CD19~+B细胞百分比[MD=-1.73,95%CI(-6.10,2.64),P=0.44]在两组间无统计学差异。(4)NK细胞百分比:灰树花多糖组NK细胞百分比[MD=2.67,95%CI(0.23,5.11),P=0.03]高于阴性对照组,差异有统计学意义。(5)巨噬细胞百分比:灰树花多糖组巨噬细胞百分比[MD=14.09,95%CI(0.84,27.34),P=0.04]高于阴性对照组,两组间差异有统计学意义。(6)INF-γ(pg/ml)的分泌量:细胞中INF-γ(pg/ml)分泌量,灰树花多糖组[SMD=5.34,95%CI(3.42,7.26),P<0.0001]高于阴性对照组,差异有统计学意义。(7)TNF-α(pg/ml)的分泌量:灰树花多糖组细胞[SMD=15.92,95%CI(9.07,22.76),P<0.05]和血清[SMD=2.82,95%CI(1.19,4.45),P<0.05]中TNF-α(pg/ml)的分泌量均高于阴性对照组,差异均有统计学意义。(8)IL-12(pg/ml)的分泌量,灰树花多糖组细胞[SMD=3.63,95%CI(2.34,4.92),P<0.05]和血清[MD=7.29,95%CI(4.77,9.82),P<0.05]中IL-12(pg/ml)的分泌量均高于阴性对照组,差异均有统计学意义。纳入21个动物实验研究中,仅5个研究进行了随机分组,但其是否采用正确的随机方法以及是否对随机序列进行隐藏均不清楚。纳入研究均未报告是否对动物进行随机化安置、对饲养者或研究者或结果评价者实施盲法,以及随机选择动物用于结果评估。2.体内实验结果显示:(1)瘤重:阴性对照组,灰树花多糖组和阳性对照组(5-FU)的平均瘤重分别为3.86±0.85g,2.20±0.54g和2.49±1.02g,其中灰树花多糖组与阴性对照组平均瘤重有统计学差异(P<0.001),阳性对照组与阴性对照组平均瘤重亦有统计学差异(P<0.01)。(2)脾T细胞增殖活性:阴性对照组与灰树花多糖组的CD4~+T细胞百分比分别为7.42±1.26和12.91±2.90,差异有统计学意义(t=4.25,P=0.002);CD8~+T细胞百分比分别为1.54±0.32和2.37±0.49,两组间差异有统计学意义(t=3.47,P=0.006);CD4/CD8值分别为4.96±1.11和5.71±2.00,差异无统计学意义(t=0.80,P=0.443)。(3)脾B细胞增殖活性:阴性对照组与灰树花多糖组的CD19~+CD49~+B细胞百分比分别为2.06±0.74和3.37±0.59,差异有统计学意义(t=3.39,P=0.007)。(4)IFN-γ(pg/ml)分泌量:阴性对照组与灰树花多糖组荷瘤鼠血清中IFN-γ(pg/ml)分泌量分别为3.61±1.28(pg/ml)和6.38±2.11(pg/ml),两组间差异有统计学意义(t=3.90,P=0.001);(5)IL-12 p70(pg/ml)分泌量:阴性对照组与灰树花多糖组荷瘤鼠血清中IL-12 p70(pg/ml)分泌量分别为15.64±6.96(pg/ml)和21.46±6.94(pg/ml),差异无统计学意义(t=2.05,P=0.052);(6)TNF-α(pg/ml)分泌量:阴性对照组与灰树花多糖组荷瘤鼠血清中TNF-α(pg/ml)分泌量分别为12.07±3.91(pg/ml)和16.00±3.04(pg/ml),差异有统计学意义(t=2.75,P=0.012)。(7)肝、肾组织苏木精-伊红染色结果均提示灰树花多糖对荷瘤小鼠的肝、肾组织未造成进一步的损伤。结论:Meta分析和动物实验研究均揭示灰树花多糖可通过影响免疫细胞增殖活性与免疫因子分泌量两方面来调节动物疾病模型的体内免疫功能。对于荷瘤鼠模型,其主要通过增强脾CD4~+T细胞、CD8~+T细胞、脾CD19~+CD49~+B细胞及NK细胞的增殖活性以及增加免疫因子INF-γ、TNF-α和IL-12的分泌量两方面来增强其免疫活性,产生了一定的抑制肿瘤生长的效应。但对于关节炎小鼠模型而言,目前仅1篇研究关注,今后尚需要开展进一步的研究加以验证。Meta分析中纳入21个动物实验研究的内部偏倚风险较高,仅24%的实验对动物进行随机分组,但其具体随机化方法以及是否采取适当的方法对随机序列进行隐藏均不清楚。纳入研究均未报告是否对动物进行随机化安置、对饲养者或研究者或结果评价者实施盲法,以及随机选择动物用于结果评估。因此,今后的动物实验应该重视随机分组、随机序列的隐藏及盲法实施,以提高其方法质量。