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背景与目的：
炎症性肠病(IBD)的发病机制和病因非常复杂，我们的前期研究和文献报道发现TLR信号通路和Th免疫反应的异常在其中起着十分重要的作用，并且这些异常在不同类型的IBD(CD和UC)中有所不同，但是其发生机制尚不明确。为何不同类型的IBD会出现不同的Th优势反应，它们的调控机制不清楚。Tim-1信号通路是最新发现的调节Th免疫反应的核心环节，并且与TLR信号通路有着密切的关系。然而Tim-1信号通路在IBD发生发展中的作用，及它与IBD的Th免疫反应和TLR信号通路变化的关系国内外尚未见报道。为此，本文研究不同类型的小鼠实验性结肠炎(分别类似人类的UC和CD的动物模型)Tim-1信号通路的变化及其与调节性T细胞(Treg)和TLR信号通路的关系，并以此为干预靶点，分别观察Tim-1信号通路对不同类型小鼠实验性结肠炎的Treg细胞和TLR信号通路的影响，及其与疾病的的关系，从这一新的角度来探讨IBD的发病机制，为IBD的防治提供新的靶点和方向。
方法：
1.实验分组
(1)Tim-1抗体未处理小鼠组；(2)Tim-1抗体预处理小鼠组；
每组内再分为：①正常对照组；②DSS模型组；③TNBS模型组。
2.小鼠实验性结肠炎模型的建立
(1)DSS诱导小鼠实验性结肠炎模型的建立：BALB/c小鼠自由饮用5％DSS溶液7天，建立小鼠急性结肠炎模型。
(2)TNBS诱导小鼠实验性结肠炎模型的建立：BALB/C小鼠禁食、不禁饮24小时后，乙醚麻醉，用3.5F导管从肛门插入肠道深约5.5cm处，灌注TNBS/50％乙醇溶液100μl(含2mgTNBS的50％乙醇溶液)，之后将小鼠倒置60秒。从造模第一天开始，每日观察并记录各组小鼠体重、大便性状，7天后处死小鼠。
(3)小鼠Tim-1信号通路的干预：小鼠建模前12h，腹腔内注射100μg抗-Fc抗体消除非特异性吸附后，再给予250μg抗-Tim-1Ab腹腔注射，对照小鼠给予同等剂量的IgG2a。
3.观察以下各项指标：
(1)各组小鼠每天的体重变化、结肠炎疾病活动指数(DAI积分)；
(2)肉眼观察小鼠结肠大体形态改变，HE染色观察小鼠结肠炎病理组织学损伤程度；
(3)Westernblot法检测小鼠结肠组织中Foxp3、MyD88、SIGIRR、Tim-1蛋白的表达；
(4)免疫组织化学染色检测小鼠结肠组织中Foxp3、MyD88、SIGIRR、NF-kBp65蛋白的表达。
结果：
1.各组小鼠体重变化及DAI积分
实验第5、7天，各模型组小鼠体重下降百分比均显著高于相应的对照组(P<0.01)。在Tim-1抗体预处理组中，DSS组小鼠体重下降百分比显著高于TNBS组(P<0.01)。小鼠体重变化在Tim-1抗体未处理组和预处理组之间有差异，仅实验第7天DSS组间差异有统计学意义(P<0.05)，其余组间差异无统计学意义(P>0.05)。
在实验第5、7天，无论是Tim-1抗体未处理组还是预处理组中，模型组小鼠DAI积分均显著高于相应对照组(P<0.01)。Tim-1抗体预处理的各组小鼠DAI积分均高于未处理组，但都无统计学意义(P>0.05)。
2.小鼠肠黏膜大体形态和结肠组织病理变化
(1)无论是Tim-1抗体未处理组还是预处理组，对照组小鼠结肠黏膜呈淡红色、光滑完整，未见充血、水肿、糜烂、溃疡，DSS组和TNBS组小鼠结肠黏膜可见充血、水肿、糜烂。
(2)无论是在Tim-1抗体未处理组还是预处理组，模型组小鼠的结肠炎症程度、病变深度、隐窝破坏均显著高于对照组(P<0.01)。Tim-1抗体预处理的各组小鼠病理组织学损伤程度均高于未处理组，但只有DSS组间差异有统计学意义(P<0.05)。
3.小鼠结肠组织中Foxp3的表达
(1)免疫印迹检测发现，在Tim-1抗体未处理组中，模型组Foxp3蛋白的表达低于对照组，但无统计学意义(P>0.05)。在Tim-1抗体预处理组中，对照组Foxp3蛋白的表达显著高于两个模型组(P<0.01)。Foxp3蛋白表达在Tim-1抗体未处理组和预处理组之间的差异无统计学意义(P>0.05)。
(2)免疫组化染色发现，无论是在Tim-1抗体未处理组还是预处理组中，对照组Foxp3阳性炎细胞数显著高于模型组(P<0.01)。Tim-1抗体预处理的各模型组Foxp3阳性细胞数均低于未处理小鼠，但只有DSS组间差异有统计学意义(P<0.05)。
4.小鼠结肠组织中SIGIRR的表达
(1)免疫印迹检测发现，在Tim-1抗体未处理组中，对照组SIGIRR蛋白表达高于模型组(P<0.01，0.05)，DSS组高于TNBS组(P<0.05)。在Tim-1抗体预处理组中，对照组显著高于DSS组(P<0.01)。SIGIRR蛋白的表达在Tim-1抗体未处理组和预处理组之间的差异无统计学意义(P>0.05)。
(2)免疫组化染色发现，无论是在Tim-1抗体未处理组还是预处理组中，对照组SIGIRR蛋白的表达显著高于模型组(P<0.01)。SIGIRR蛋白的表达在Tim-1抗体未处理组和预处理组之间的差异无统计学意义(P>0.05)。
5.小鼠结肠组织中Myd88的表达
(1)免疫印迹检测发现，无论是在Tim-1抗体未处理组还是预处理组中，对照组Myd88蛋白的表达显著低于模型组(P<0.01)，DSS显著组高于TNBS组(P<0.01)。Myd88蛋白的表达在Tim-1抗体未处理组和预处理组之间的差异无统计学意义(P>0.05)。
(2)免疫组化染色发现，无论是在Tim-1抗体未处理组还是预处理组中，对照组Myd88蛋白的表达显著低于模型组(P<0.01)，在Tim-1抗体预处理组中，DSS组还显著高于TNBS组(P<0.01)。同时Tim-1抗体预处理的各模型组MyD88的表达高于未处理组，但只有DSS组间差异有统计学意义(P<0.05)。
6.小鼠结肠组织中Tim-1的表达
免疫印迹检测发现，在Tim-1抗体未处理组中，对照组Tim-1蛋白的表达显著高于模型组(P<0.01)；在Tim-1抗体预处理组中，对照组Tim-1蛋白表达均高于模型组，对照组和TNBS组之间有显著差异(P<0.01)，但对照组和DSS组之间差异无统计学意义(P>0.05)，DSS组显著高于TNBS组(P<0.05)。在对照组和DSS组中，Tim-1抗体未处理组的Tim-1蛋白表达均显著低于预处理组(P<0.01)。
7.小鼠结肠组织中NF-kBp65的表达
免疫组化染色发现，无论是在Tim-1抗体未处理组还是预处理组中，对照组NF-kBp65蛋白表达显著低于两个模型组(P<0.01)；在Tim-1抗体预处理组中，DSS组的表达还显著高于TNBS组(P<0.05)。Tim-1抗体预处理的各模型组NF-kBp65表达均高于未处理组，但只有DSS组间差异有统计学意义(P<0.01)。
结论：
1.本研究成功的建立了DSS及TNBS诱导的实验性结肠炎小鼠模型，并且Tim-1抗体预处理可加剧小鼠实验性结肠炎的肠黏膜病变，提示了Tim-1信号通路参与了小鼠实验性结肠炎的发病。
2.Tim-1抗体预处理后小鼠实验性结肠炎肠黏膜中。Foxp3蛋白表达降低，提示Tim-1抗体可能通过调控Treg细胞反应来影响小鼠结肠炎的发生。
3.Tim-1抗体预处理后小鼠实验性结肠炎肠黏膜中NF-kBp65、MyD88蛋白表达上升，提示Tim-1抗体可能通过激活TLRs/NF-kB信号通路来影响小鼠实验性结肠炎的发生。