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第一部分小鼠单核细胞RAW264.7的细胞生物学特征
目的：观察小鼠单核细胞RAW264.7的一般生物学特征。方法：小鼠单核细胞RAW264.7细胞购自美国培养物保存中心。用倒置相差显微镜观察RAW264.7细胞的形态。RAW264.7细胞接种于24孔板，每天取3孔胎盘蓝染色后进行细胞计数，绘制生长曲线。RT-PCR检测培养3～21天的RAW264.7细胞的基因mRNA表达的变化。
结果：RAW264.7在DMEM培养基中生长良好，细胞贴壁生长，形态以类圆形和不规则多边形为主，一般含1-2个核，细胞胞体较小，有伪足。细胞生长较快，5～6天即可汇片。成熟破骨细胞的特异表型基因(如TRAP,MMP9,integrinαv等)及与骨吸收有关的功能基因(如CathepsinK、CAⅡ等)在RAW264.7细胞都有表达。但培养3～21天后，RAW264.7细胞的MMP9、TRAP、RANK、CathepsinK等的mRNA表达不随时间而改变。
结论：RAW264.7细胞具有稳定的特异基因表达谱，是一种较理想的破骨细胞前体细胞。
第二部分RANKL诱导的RAW264.7细胞分化
目的：观察RANKL诱导的小鼠单核细胞RAW264.7分化特性。
方法：50ng/ml的RANKL诱导RAW264.7细胞6天后，用抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色观察TRAP阳性多核细胞；HE染色光镜下观察及吖啶橙染色激光共聚焦显微镜(LCSM)下观察多核破骨细胞的形态。用10，30和50ng/ml的RANKL诱导RAW264.7细胞6天后，RT-PCR检测RAW264.7细胞的功能基因mRNA表达；经50ng/ml的RANKL诱导9天后，电镜观察成熟的破骨细胞及在骨片上所形成的骨吸收陷窝，光镜下观察成熟的破骨细胞在钙磷覆盖的破骨细胞活性分析板上的骨吸收陷窝。
结果：经RANKL诱导6天后，RAW264.7细胞可分化为TRAP阳性的成熟多核破骨细胞。RANKL呈剂量依赖性上调CathepsinK、CA-Ⅱ、TRAP等基因的mRNA表达。其中以50ng/mlRANKL上调这些基因表达的作用最显著(P＜0.05)。经RANKL诱导9天后，RAW264.7细胞可分化成具有骨吸收能力的成熟破骨细胞。
结论：RANKL上调破骨细胞CathepsinK、CA-Ⅱ、TRAP等基因的mRNA表达，诱导RAW264.7细胞分化为成熟型破骨细胞。
第三部分抗坏血酸抑制RANKL诱导的RAW264.7细胞分化和功能
目的：研究抗坏血酸对RANKL诱导体外培养的破骨细胞前体细胞RAW264.7分化为成熟多核破骨细胞的影响，探讨抗坏血酸在破骨细胞前体细胞分化中的作用及机制。
方法：利用不同浓度抗坏血酸与RANKL单独或共同处理RAW264.7细胞，MTT法测定细胞的增殖活力，抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色观察TRAP阳性多核细胞，RT-PCR测定破骨细胞的特异基因mRNA表达，Westemblot检测碳酐酶Ⅱ蛋白的表达，用骨吸收陷窝面积计数法分析破骨细胞的骨吸收功能。
结果：抗坏血酸和RANKL抑制RAW264.7细胞的增殖(P＜0.05)，但两者之间无协同效应。抗坏血酸本身不能诱导RAW264.7细胞的分化，但可抑制RANKL诱导的TRAP阳性多核破骨细胞形成(P＜0.05)。抗坏血酸下调RANKL诱导的CAⅡ和RANKmRNA表达及CAⅡ蛋白表达，抑制其骨吸收功能(P＜0.05)。
结论：抗坏血酸直接抑制RANKL诱导的破骨细胞前体细胞分化和功能。