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研究背景和目的:从全球范围看,相对于全身其他部位的恶性肿瘤来说,头颈部鳞癌恶性肿瘤的发生率较高,位列第6,每年有大约50万的新发病例,并且造成20万人的死亡。据统计,头颈部恶性肿瘤的发病率为20.6/10万[1],其中以口腔癌发病率最高,最常见病理类型为鳞状细胞癌,占比约90%[15]。micro RNAs(mi RNAs)是19-23个碱基大小的RNA序列,广泛存在于动植物、甚至细菌中,虽然不编码蛋白质,却能对细胞的生理及病理过程能起到重要的作用。肿瘤的发生是基因突变的结果,其的形成及发展过程中伴随着多种mi RNAs的异常表达,这种异常表达随着肿瘤部位及组织及病理特征的不同而变化。为了更深入的认识mi RNAs在口腔鳞状细胞癌中所发挥的作用,本研究对影响调控口腔鳞癌细胞增殖及凋亡的mi RNAs进行了筛选、鉴定并进一步实验验证其具体作用机制。方法:我们对选取的8对口腔鳞癌及其癌旁正常组织进行mi RNA芯片分析筛选口腔鳞癌组织中差异化表达的mi RNAs;在临床样本及口腔鳞癌细胞系中利用real-time PCR的方法进行差异性验证,通过体外细胞实验的方法对筛选出的差异化mi RNAs进行基因功能的检测;我们进行了体外细胞增殖实验(CCK8实验)、单细胞平板克隆实验、凋亡实验以及细胞周期检测,以评估筛选出的mi RNAs对口腔鳞癌细胞的增殖及凋亡的影响。通过生物信息学网站的分析预测以及双荧光素酶报告基因系统寻找并验证其相关靶基因;应用转录本拷贝数检测及免疫印迹法(Western blot)验证mi RNAs对相应靶基因在m RNA及蛋白质水平的调控作用。结果:mi R-330-3p在29对口腔鳞癌患者临床组织样本(每对样本包括口腔鳞癌组织以及其癌旁正常组织)中的表达为:癌旁组织中mi R-330-3p的表达量(10-3×U6)为7.476±3.537,口腔鳞癌组织表达量为13.059±5.045(t=5.282,n=29,P<0.0001),两组对比具有统计学意义;mi R-330-3p在增殖能力较弱的HN4及HN6细胞系中表达水平较低,而在高增殖能力的HN13及SCC25中表达水平较高;mi R-330-3p过表达能明显提高癌细胞的增殖及单细胞克隆形成能力,并且显著降低口腔鳞癌细胞的凋亡率;深入研究发现,mi R-330-3p能够在m RNA及蛋白质水平上负向调节靶基因程序性细胞凋亡因子4(PDCD4)的表达,降低鳞癌细胞的凋亡率,从而间接促进了肿瘤细胞的增殖能力。结论:mi R-330-3p在口腔鳞癌细胞中表达显著高于癌旁正常组织,并且与患者预后呈现负相关;mi R-330-3p能够与PDCD4的3’UTR结合,负向调控抑癌基因PDCD4的表达,显著降低口腔鳞癌细胞的凋亡率,发挥促癌基因的作用。故mi R-330-3p可作为基因治疗的候选靶点。