【摘 要】
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水产品由于组织脆弱、可溶性蛋白质含量高,因此极易腐败变质。新鲜度对于水产品的销售、贮藏及以水产品为原料的精深加工有着重要的影响。开发水产品新鲜度的快速检测方法,对于保障水产品的质量安全具有重要意义。次黄嘌呤(Hypoxanthine,Hx)是水产品死亡后三磷酸腺苷(ATP)分解代谢过程中的主要产物,其含量对于反映水产品的早期新鲜度具有重要的意义。本论文以半胱氨酸(Cysteine,Cys)为模板合
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水产品由于组织脆弱、可溶性蛋白质含量高,因此极易腐败变质。新鲜度对于水产品的销售、贮藏及以水产品为原料的精深加工有着重要的影响。开发水产品新鲜度的快速检测方法,对于保障水产品的质量安全具有重要意义。次黄嘌呤（Hypoxanthine,Hx）是水产品死亡后三磷酸腺苷（ATP）分解代谢过程中的主要产物,其含量对于反映水产品的早期新鲜度具有重要的意义。本论文以半胱氨酸（Cysteine,Cys）为模板合成铜纳米簇（Cys-Cu NCs）,利用Cys-Cu NCs催化H2O2氧化3,3’,5,5’-四甲基联苯胺（3,3’,5,5’-Tetramethylbenzidine,TMB）发生显色反应的过氧化物拟酶活性,以及受H2O2影响发生荧光猝灭的特点,结合Hx在黄嘌呤氧化酶（Xanthine oxidase,XOD）催化下产生H2O2,分别建立比色法和荧光分析法检测Hx,并将这些方法应用于水产品中Hx含量的测定,通过与总挥发性盐基氮（TVB-N）比较,建立Hx含量与水产品新鲜度的对应关系,实现对水产品新鲜度的评价。论文主要分为以下三个部分:一、简要介绍了Cu NCs的性质、合成方法以及在传感、生物成像和抑菌方面的应用。简述了水产品新鲜度和Hx检测的研究进展。二、基于Cys-Cu NCs建立比色法,实现对Hx的检测。在室温条件下以Cys为模板合成Cys-Cu NCs,对Cys-Cu NCs的形貌、元素组成和表面官能团进行表征。通过实验发现Cys-Cu NCs具有良好的过氧化物拟酶活性,能催化H2O2氧化TMB,使反应体系由无色变为蓝色,在此基础上结合XOD催化Hx产生H2O2,建立了一种检测Hx的比色方法。在最佳条件下,Hx浓度在4-100μmol/L内与拟酶催化体系在652 nm处的吸光度呈良好的线性关系,最低检测限为1.2μmol/L。利用此方法实现草鱼鱼肉中Hx含量的测定,结合TVB-N法,实现对草鱼新鲜度的评价。三、基于Cys-Cu NCs建立荧光分析法,应用于鲤鱼鱼肉中Hx的检测。实验表征了Cys-Cu NCs的荧光特性,结果表明Cys-Cu NCs的最大激发波长为370 nm,最大发射波长为495 nm。实验发现H2O2对Cys-Cu NCs有明显的荧光猝灭效应,基于此效应和Hx在XOD催化下生成H2O2的反应,建立了一种用于检测Hx的荧光分析法。在最适条件下,Hx浓度在8-400μmol/L范围内与荧光猝灭效率呈良好的线性关系,最低检测限为0.7μmol/L。最后,将所建立的方法应用于鲤鱼鱼肉中Hx含量的测定,结合TVB-N,成功实现对鲤鱼鱼肉新鲜度的判断。
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