猪链球菌随机扩增多态性DNA分析及多价疫苗研制

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猪链球菌病是由链球菌(Streptococcus)感染所引起的猪的一类疾病的总称,是一种分布范围极为广泛的猪传染病,目前20多个国家和地区已有该病的报道。在我国华南、西南、华东、江西及江苏等地曾大面积爆发流行过,其发病率也有逐年上升的趋势,给养殖业造成了巨大经济损失,是多年来困扰养猪业发展的重要传染病之一。本研究是在对吉林省分离的猪链球菌菌株分离、鉴定基础上,应用随机扩增多态性DNA(RAPD)方法对分离株进行基因分型,并根据菌株间的遗传距离,挑选出具有代表性的菌株作为疫苗株,研制多价灭活疫苗用于本地区该病的免疫防制。现总结如下: 1.对吉林省离的12株猪链球菌进行了鉴定和分群,初步证实该地区的猪链球菌流行株以D群、C群链球菌为主,还有G群链球菌存在。 2.采用随机扩增多态性DNA方法对分离菌株进行分析,优化了RAPD对猪链球菌分型的反应条件,确立了最佳反应体系。在所采用的20条随机引物,有7引物可产生较好的多态性条带。 3.RAPD分型所得到的不同菌株之间的遗传距离并据此将12株猪链球菌分为3个聚类群。从而在分子水平上为猪链球菌病流行病学调查和防制提供了理论依据。 4.RAPD分型结果表明,不同血清群的菌株具有不同的指纹图谱,同一血清群的菌株指纹图也存在差异,由此说明RAPD分型比传统分型方法更能反映病原菌菌株间的亲缘关系,从分子水平上揭示了不同菌株之间的遗传距离,是人畜疾病分子流行病学调查非常有用的工具。 5.应用RAPD方法挑选出的疫苗株制成的多价灭活疫苗,经免疫效力试验证实,该方法挑选的疫苗株与常规方法挑选的疫苗株相比更能反映出菌株间的亲缘关系,因而更具代表性。 6.本实验研制的多价灭活疫苗经临床初步应用,安全性好、免疫效力高,能够用于吉林省猪链球菌病的防治,具有较好的免疫效果,值得推广。
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