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目的:观察院内制剂启明丸对豚鼠形觉剥夺性近视(Form Deprivation Myopia，FDM)进展的干预作用。通过检测豚鼠屈光度及眼轴的变化,评价启明丸对近视进展的影响。同时应用组织学石蜡切片的方法观察后极部巩膜组织结构的变化,应用蛋白免疫印迹法检测巩膜组织中基质金属蛋白酶2(Matrix Metalloproteinase-2,MMP-2)、基质金属蛋白酶抑制剂 2(Tissue inhibitor of metalloproteinases-2,TIMP-2)和转化生长因子 β1(Transforming growth factor betal,TGF-β1)的相对分子表达量的差异,初步探讨启明丸在近视进展中对巩膜影响。方法:1.近视模型的制备:选取三周龄三色豚鼠共40只作为实验动物。适应性饲养三天后,将实验动物随机分为四组,分别为中药高剂量组、中药低剂量组、模型对照组和空白对照组,每组各10只。将前三组豚鼠右眼作为实验眼以乳胶气球面罩进行遮挡,左眼暴露做自身对照。持续四周后,通过检影验光确认诱导豚鼠出现近视,以备实验。2.药物干预:诱导豚鼠出现近视后,对中药高剂量组、中药低剂量组、模型对照组持续造模并灌胃,每日一次,共计灌胃四周。中药高、低剂量组分别以不同浓度的启明丸药粉灌胃;模型对照组以等剂量的盐水灌胃:空白对照组正常饲养不做特殊处理。3.指标检测:(1)活体生物学检测:对各组豚鼠在实验开始前、实验四周、实验八周,分别检测其屈光度和眼轴长度的变化;(2)组织病理学和分子生物学检测:实验八周后,处死实验动物并取眼球用于实验操作。取眼球去除眼前节及附着的多余组织,将眼杯做石蜡切片行伊红-苏木素染色,在光学显微镜下观察各组间后极部巩膜胶原纤维的差异;取眼球沿赤道部剪开,取后半部巩膜组织,用蛋白质免疫印迹法(Western Blot,WB)对巩膜组织中MMP-2、TIMP-2、TGF-βl的相对分子表达量进行检测,并计算MMP-2/TIMP-2相对分子表达量的比值。结果:1.动物模型:(1)实验动物评价:对中药高剂量组、中药低剂量组、模型对照组和空白对照组四组豚鼠之间的屈光度和眼轴长度进行分析,比较四组动物间屈光度和眼轴长度的差异均无统计学意义(P>0.05),符合实验动物要求。(2)近视模型制备:对中药高剂量组、中药低剂量组和模型对照组豚鼠的右眼以乳胶气球面罩进行遮挡,持续四周后检测各组豚鼠的屈光度。模型各组豚鼠的屈光度均呈负性增长,屈光度改变平均为-3.82D,对比模型各组与空白对照组造模前后屈光度的变化,其差异有高度统计学意义(P<0.01)。提示形觉剥夺法成功诱导实验豚鼠出现近视。2.启明丸对豚鼠屈光度及眼轴的影响:(1)屈光度变化:在各组实验动物模型持续造模状态下,中药高、低剂量组分别以不同浓度的启明丸药粉灌胃,灌胃完成后检测屈光度。其中中药高剂量组和中药低剂量组的近视进展程度低于模型对照组,三组间对比屈光度的差异有统计学意义(P<0.05),中药高、低剂量组间差异无统计学意义(P>0.05);各组左右眼间屈光度比较,其中模型对照组的差值大于中药高、低剂量组,三组间比较差异有统计学意义(P<0.05),中药高、低剂量组间差异无统计学意义(P>0.05)。(2)眼轴的变化:在各组实验动物模型保持造模状态下,对中药高、低剂量组分别以不同浓度的启明丸药粉灌胃,灌胃完成后检测眼轴长度。其中中药高剂量组和中药低剂量组的眼轴增长的程度低于模型对照组,三组间眼轴长度变化有统计学意义(P<0.05)，中药高、低剂量组眼轴长度的差异没有统计学意义(P>0.05);各组左右眼间眼轴长度比较,其中模型对照组的差值大于中药高、低剂量组,三组间比较差异有统计学意义(P<0.05),中药高、低剂量组间差异无统计学意义(P>0.05)。3.启明丸对豚鼠巩膜组织结构的影响:实验八周后制备巩膜组织石蜡切片,在光学显微镜下观察豚鼠的巩膜组织。(1)空白对照组:可见胶原纤维之间排列紧密,纤维之间的联结方式呈现出板层态和交织态并存,在巩膜各层间胶原纤维的排列整齐。(2)模型对照组:模型对照组与空白对照组相比,其巩膜组织结构松散,胶原纤维之间的空隙增大、排列稀疏,且出现断裂、分离的现象,并且巩膜厚度变薄。(3)中药高、低剂量组:中药高、低剂量组与模型对照组相比,胶原纤维的层间结构清晰,胶原纤维之间的联结方式以板层态为主,较少呈现交织态,并且其巩膜厚度与空白对照组大致相等,厚于模型对照组。4.启明丸对豚鼠巩膜重塑相关因子蛋白表达的影响:实验八周后提取巩膜组织蛋白:(1)MMP-2、TIMP-2:各组间做比较,模型对照组中MMP-2相对蛋白表达量最大,其与空白对照组MMP-2的相对蛋白表达量之间的差异有统计学意义(P<0.05);中药高、低剂量组巩膜MMP-2的相对蛋白表达量与模型组相比降低,其差异有统计学意义(P<0.05):模型对照组MMP-2/TIMP-2相对蛋白表达量的比值明显大于其他三组,其差异有统计学意义(P<0.05)。(2)TGF-β1:模型对照组和中药高、低剂量组TGF-β1的相对蛋白表达量均要高于空白对照组,其差异有统计学意义(P<005);中药高、低剂量组和模型对照组TGF-β1的相对蛋白表达量的差异无统计学意义(P>0.05)。结论:1.实验结果显示启明丸可以降低豚鼠近视屈光度的进展程度,延缓眼轴的增长,对形觉剥夺性豚鼠的近视进展有干预作用;2.启明丸通过调节MMP-2的表达,使MMP-2与TIMP-2的表达趋于平衡,抑制了形觉剥夺性近视豚鼠的巩膜细胞外基质的病理性降解,进而影响豚鼠巩膜的重塑,这是启明丸干预近视进展的可能机制,其具体作用通路尚需进一步研究。