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白细胞介素-17A(Interleukin-17,IL-17A)即通常所说的IL-17,是白细胞介素-17家族成员之一,能诱导多种细胞分泌促炎性细胞因子,是典型的调节型细胞因子,在免疫反应中具有抗感染和参与多种炎症损伤的双重作用。多房棘球蚴(又称泡球蚴,Echinococcus multilocularis larvae)可以引起一种严重的、可潜在致死的多房(或者泡型)棘球蚴病。泡球蚴在宿主体内可诱发体液免疫和细胞免疫应答,同时可观察到免疫耐受和免疫病理现象。为了探索IL-17A对多房棘球蚴侵染BALB/c小鼠的免疫调节作用,本研究主要完成了以下4项内容:(1)合成了完整的小鼠IL-17A(mIL-17A)基因,克隆入pcDNA3.1(+)真核表达载体,构建了pcDNA3.1-mIL-17A表达质粒,PCR和双酶切鉴定正确后转染293T细胞,48 h和72 h后收样提取RNA,实时定量PCR鉴定mIL-17A在293T细胞内高效表达。(2)根据mIL-17A基因设计4个小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)靶点序列,把单链的引物退火成双链oligo序列,连接pGPU6/GFP/Neo干扰载体,构建了p GPU6-shRNA-136、pGPU6-shRNA-180、pGPU6-shRNA-288和pGPU6-shRNA-381共4个重组干扰载体。这4个干扰质粒与pcDNA3.1-mIL-17A过表达质粒共同转染293T细胞,实时定量PCR和免疫荧光法检测mIL-17A的转录和表达,结果表明4个片段对mIL-17A均有干扰作用,片段mIL-17A-136干扰效果最强,干扰后24 h和48 h的平均消减率83.5%。(3)基于对mIL-17A表达干扰效果最好的mIL-17A-136 siRNA片段包装干扰腺病毒AD-pAVT1502,并包装mIL-17A过表达腺病毒AD-pSB2000。腺病毒包装纯化后的病毒滴度测定显示,AD-pAVT1502和AD-pSB2000的滴度分别为7.58×1010 PFU/mL和5.85×1010 PFU/mL。两种腺病毒共感染HEK293细胞,实时定量PCR和间接免疫荧光检测结果表明AD-pAVT1502的干扰效果和AD-pSB2000的蛋白表达效果均良好,实时定量PCR检测结果分析显示,AD-pAVT1502的干扰表达的消减率为55%,AD-pSB2000的蛋白表达的增长率为842%。(4)重组腺病毒感染多房棘球蚴侵染小鼠,间接ELISA定量检测血清IL-17A,小鼠细胞因子定量抗体芯片检测小鼠脾脏细胞因子的表达,实验结果表明,腺病毒感染小鼠血清mIL-17A浓度受到腺病毒表达的调节,差异显著(P<0.05)。AD-pAVT1502和AD-pSB2000感染多房棘球蚴侵染小鼠后,多种细胞因子的组间差异显著(P<0.05),IL-17A表达水平调节对多房棘球蚴侵染小鼠的CD30L、Fas L、GM-CSF、IFN-γ、IL-1b、IL-2、IL-3、IL-5、IL-6、IL-7、IL-13、IL-21和TNF-α等细胞因子的免疫调节作用较强。