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目的：采用真核表达载体pVAX1,构建重组大鼠肾上腺髓质素(rrADM),直接注射法导入大鼠腓肠肌,通过构建大鼠骨骼肌缺血再灌注模型,探讨rrADM对骨骼肌缺血再灌注损伤是否具有保护作用。并比较rrADM、依达拉丰、维拉帕米、别嘌呤醇和罂粟碱在骨骼肌缺血再灌注损伤中保护作用的差异。方法：1.SD大鼠1只,取大鼠肾上腺提取总RNA,用RT-PCR方法逆转录合成ADM基因的cDNA,以cDNA为模板扩增,将产物克隆至PMD-18T载体上,亚克隆至pVAX1真核表达载体上,获得rrADM质粒DNA,采用碱性裂解法大量提取质粒DNA,采用聚乙二醇分级沉淀法纯化质粒DNA。计算所获质粒DNA浓度。2.SD大鼠18只,体重(203±18.4)g,按体重完全随机分为3组,每组6只。即正常对照组、空载体组、700μg·kgbw-1rrADM组。3组分别注射生理盐水1ml、pVAX1质粒DNA生理盐水溶液1ml、rrADM质粒DNA生理盐水溶液1ml,采用直接肌注法导入大鼠左后肢腓肠肌,质粒DNA注射剂量均为700μg·kgbw-1,每周一次,连续4周。4周后取注射部位肌肉,免疫组织化学法检测各组ADM的表达情况。3.SD大鼠64只,体重(203±18.4)g,按体重完全随机分为8组,每组8只。即正常对照(C)组、缺血再灌注模型(IR)组、空载体(Ev)组、rrADM组、依达拉丰(Ed)组、维拉帕米(Vp)组、别嘌呤醇(Ap)组、罂粟碱(Pp)组。术前4周,Ev组、rrADM组分别腓肠肌注射pVAX1质粒DNA生理盐水溶液1ml、rrADM质粒DNA生理盐水溶液1ml,其它6组,分别腓肠肌注射等量的生理盐水。每周一次,连续4周,4周后用于骨骼肌缺血再灌注实验,缺血4小时,再灌注3小时。再灌注前15分钟,Ed组、Vp组、Ap组、Pp组分别腹腔注射Ed0.5mg/kg盐水溶液1ml、Vp 2mg/kg盐水溶液1ml、Ap 50mg/kg盐水溶液1ml、Pp5mg/kg盐水溶液1ml；其它4组分别腹腔注射等量的生理盐水。术毕,取大鼠腓肠肌组织并收集血清,检测血清肌酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH)含量,检测肌组织丙二醛(MDA)、总超氧化物歧化酶(T-SOD)含量,并对肌组织进行病理形态学检查。结果：1.所获基因序列与Genebank中的ADM基因序列比较,两者完全一致。对rrADM XbaⅠ和HindⅢ双酶切鉴定结果为阳性。纯化后的质粒DNA:OD260值为0.912,OD280值为0.498,OD260/OD280比值为1.831。所获质粒DNA浓度为4.560mg/ml。2.注射部位的腓肠肌组织免疫组织化学检测显示：正常对照组、空载体组腓肠肌组织ADM表达水平低下,结果呈阴性；700μg·kgbw-1 rrADM组腓肠肌组织ADM表达水平高,结果呈阳性。3.与IR组大鼠血浆CK、LDH及肌组织MDA含量比较,rrADM组、Ed组、Vp组、Ap组、Pp组水平均明显降低(P<0.01)；与IR组大鼠肌组织T-SOD含量比较,rrADM组、Ed组、Vp组、Ap组、Pp组水平均明显升高(P<0.01)。IR组与Ev组之间各指标差异均无统计学意义(P>0.05)。rrADM组、Ed组、Vp组、Ap组、Pp组,5组与Ev组相比各指标差异均有统计学意义(P<0.01)。rrADM组、Ed组、Vp组、Ap组、Pp组5组间各指标,除大鼠血浆LDH含量rrADM组与Ap组相比下降了18.20%(P<0.05),其余各组间各指标差异均无统计学意义(P>0.05)。病理学检查表明,IR组与Ev组注射部位骨骼肌镜下可见大面积肌组织结构紊乱,边界模糊不清,炎性细胞聚集、渗出较多,组织水肿严重。而rrADM组、Ed组、Vp组、Ap组、Pp组5组镜下偶见轻微的肌丝断裂或组织水肿,少量或未见炎性细胞聚集,肌组织结构正常,病理学改变明显好于IR组与Ev组。结论：1.成功获得大鼠ADM基因,并成功的重组了大鼠肾上腺髓质素,大量提取和纯化的rrADM质粒DNA,符合动物实验的用药要求。2.rrADM质粒DNA注射入大鼠腓肠肌后,使组织中ADM表达上调。表明质粒构建是成功的,质粒的导入和组织摄取情况较好,可用于下一阶段的实验。3.rrADM能提高大鼠骨骼肌组织T-SOD活性,降低肌组织MDA含量和血浆CK、LDH含量,对大鼠骨骼肌缺血再灌注损伤有保护作用。依达拉丰、维拉帕米、别嘌呤醇和罂粟碱对大鼠骨骼肌缺血再灌注损伤有保护作用,且rrADM、依达拉丰、维拉帕米、别嘌呤醇和罂粟碱对大鼠骨骼肌缺血再灌注损伤的保护作用没有差异。