论文部分内容阅读
石斛属（Dendrobium S W．）是兰科（Orchidaceae）多年生草本植物。在《本草纲目》中石斛被列为上品，具有明目强身、镇痛消炎、抗肿瘤、抗衰老、增强机体免疫力等功效。本研究以金钗石斛为材料，在离体培养、遗传稳定性两领域开展了工作，以期为资源的离体保存、快繁等提供理论指导和构建技术平台，现取得以下结果： 1 茎段离体培养技术的建立与优化 选用金钗石斛的嫩茎为外植体，用70％酒精浸泡30s后，分别用以下两种方式灭菌，1)0.1％升汞灭菌12min，2)0.1％升汞+数滴Tween80灭菌10min；两种灭菌方式的灭菌效果差别很大，污染率分别为73.3％、16.7％。随后接种在MS+BA（1.0mg／L）+NAA（0.4mg／L）+蔗糖（3.0％）+琼脂粉（0.7％）培养基上，萌发后转接到MS+BA（1.2mg／L）+NAA（0.4mg／L）+蔗糖（3.0％）+琼脂粉（0.7％）培养基上，通过器官型方式，诱导侧芽的萌发增殖；壮苗培养以1／2MS+NAA（0.5mg／L）+IBA（0.5mg／L）+蔗糖（2.0％）+琼脂粉（0.7％）培养基上效果最佳；生根培养以1／2MS+NAA（1.0mg／L）+蔗糖（2.0％）+琼脂粉（0.7％）培养基上效果最佳；移栽时将一次性塑料杯底部及四周打上孔，先放入两个松果后再铺上苔藓或者树皮均能获得90％以上的移栽成活率。 2 金钗石斛愈伤组织培养体系 愈伤组织诱导：采用无菌试管苗的茎段诱导愈伤组织，不同的基本培养基、生长激素、细胞分裂素及激素浓度对愈伤组织的诱导上有一定差异，诱导率为改良MS2＞MS＞1／2MS＞＞改良MS1；NAA＞IBA；BA＞KT；在MS+NAA（0.8mg／L）+BA（0.5mg／L）+蔗糖（3.0％）+琼脂粉（0.7％）培养基上诱导率稍高。 愈伤组织增殖：经综合评定，MS＞1／2MS＞改良MS2＞＞改良MS1；NAA、IBA＞IAA；蔗糖＞葡萄糖；在MS+NAA（0.8mg／L）+BA（0.5mg／L）+蔗糖（3.0％）+琼脂粉（0.7％）培养基上增殖效果最好，约90d左右增殖倍数可达23.98倍。愈伤组织培养的最佳时间是90—100d。 愈伤组织再分化：GA对愈伤组织的再分化效果极强，远远强于BA、KT，当GA浓度为0.5—1.0mg／L时有利于诱导愈伤组织再分化，出苗整齐，生长状况好。 丛生芽壮苗增殖培养：经愈伤组织再分化形成的丛生芽在MS+IBA（0.4mg／L）+蔗糖（2.0％）+琼脂粉（0.7％）培养基上增殖效果及苗的生长状况最好。 3 愈伤组织遗传稳定性的RAPD检测 采用42个随机引物对金钗石斛不同继代次数的愈伤组织DNA进行RAPD检测，结果表明，愈伤组织在继代15代以内，没有检测到遗传变异，但在16代时，DNA分子标记变异率为0.11％。