【摘 要】
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mGluRs在谷氨酸能的突触中对于形成兴奋性神经传递起着重要作用，而mGluRs失敏是调节这些受体功能的一种重要机制。GRKs已经证实在多种GPCRs失敏中起调节作用。GRKs和第二信使
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mGluRs在谷氨酸能的突触中对于形成兴奋性神经传递起着重要作用，而mGluRs失敏是调节这些受体功能的一种重要机制。GRKs已经证实在多种GPCRs失敏中起调节作用。GRKs和第二信使依赖的蛋白激酶都能够介导mGluR1失敏，GRK2介导的mGluR1失敏不依赖于磷酸化和β-arrestin。这些研究结果提示了一种GRK2调节mGluR5的新颖机制，对受体在神经传递中的功能调节具有重大意义。
本文以GRK2和mGluR5为研究对象，对GRK2介导的mGluR5信号调节进行了初步探讨。利用分子克隆技术构建了缺失激酶活性的GRK2突变体GRK2-K220R和缺失磷酸化位点的mGluR5突变体mGluR5-del847-T840A，利用ELISA分别检测了mGluR5/mGluR5-del847-T840A单独转染HEK293细胞时的表达量和与GRK2/GRK2-K220R共转染时的表达量，然后利用IP3生成实验检测了受体信号活性，结果显示了GRK2介导了mGluR5非磷酸化依赖的失敏，并且这种失敏效应不是由于受体表达量变化引起的。构建了带有HA抗原标记的全长和5种包含GRK2不同功能域的剪切体，利用ELISA和Western Blot检测到其能够在HEK293细胞中成功表达，为后续检测是GRK2的哪部分结构域参与了GRK2介导的受体失敏提供了基础。研究证实了GRK2介导的mGluR5失敏是非磷酸化依赖的，且GRK2对受体的失敏调节不是由于GRK2影响了受体表达量而引起的，这些结果为后续深入研究GRK2介导的GPCRs失敏机制奠定了基础。
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