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喉癌是临床上常见的恶性肿瘤疾病之一，其生长速度快,具有较强的侵袭力，中晚期易发生转移，已成为严重威胁人类生命和健康的疾病。目前主要采用手术结合放疗、化疗以及生物治疗等综合治疗手段。然而，喉癌对化疗药物敏感度低、抵抗力强，一直是喉癌治疗的一大难题。肿瘤的发生、发展及转移机制复杂，是在多种因素影响下，由多种基因和多条信号通路在不同阶段作用的结果。现阶段的研究证实，Wnt/β-catenin信号转导通路是参与细胞生长发育的经典途径之一，若其传导障碍则引起细胞生长、分化异常，从而引发肿瘤的形成。 Wnt基因是细胞外分泌的一组糖蛋白家族，目前在哺乳动物体内已经发现了19种 Wnt基因及多种 Wnt受体[1]。Wnt信号通路是一条高度保守的信号转导通路，参与了多种胚胎的发育过程。其通过调节细胞的增殖、分化、凋亡、黏附、迁移和极性等，在机体发育及各种生理过程中起着重要的作用。主要分为经典的和非经典的 Wnt信号通路，前者依赖于β-catenin蛋白的作用，后者主要依赖于细胞极性（PCP）和Ca2+信号通路。 β-catenin是经典 Wnt信号通路的核心成分，是一个多功能的蛋白基因，定位于染色体3q21.3－p22，由16个外显子组成，在果蝇中称 Armadillo基因，是进化上保守的分子，在动物的发育和稳态过程中发挥了重要作用[2-3]。除了作为一种细胞骨架蛋白，与 E-cadherin和α-catenin形成粘附复合体，参与细胞黏附。β-catenin还是Wnt信号转导通路中的关键调节因子,广泛存在于各种类型的细胞，如内皮细胞、成纤维细胞、成骨细胞中，在参与这些细胞的增殖、分化和凋亡等方面发挥了重要的调节作用。 第一部分 siRNA干扰β-catenin基因对喉癌Hep-2细胞增殖、凋亡和侵袭的影响 目的：应用小分子干扰 RNA干扰β-catenin基因在喉癌 Hep-2细胞中的表达，探讨干扰β-catenin基因后对喉癌 Hep-2细胞增殖、凋亡和侵袭能力的影响。 方法：RNA干扰技术干扰喉癌 Hep-2细胞β-catenin基因的表达，实验分为 siRNA-β-catenin-Hep-2干扰组，β-catenin-Neg阴性对照组，空白对照组，实时荧光定量 PCR、Western-blot方法检进行干扰效果鉴定；采用MTT法检测细胞增殖能力、流式细胞仪 AnnexinPI法检测细胞凋亡率、transwell法观察细胞的迁移侵袭能力。 结果：qPCR结果表明β-catenin-siRNA干扰组 mRNA相对表达量较空白对照组下降达70％，western blot结果显示干扰组β-catenin蛋白相对表达量为（0.545±0.111）较空白对照组（1.507±0.139）和阴性对照组（1.429±0.089）明显下降(F=21.859，P<0.05)，表明干扰了β-catenin基因在喉癌 Hep-2细胞中的表达。细胞增殖实验证实干扰β-catenin基因表达导致喉癌细胞增殖明显受抑制(P<0.01)，流式细胞仪 AnnexinPI法检测说明，β-catenin-siRNA干扰组凋亡率（18.80±0.81）%与空白对照组（8.6±0.68）%和阴性对照组（9.03±0.26）%相比明显增加（F=253.9，P<0.01）。Transwell侵袭实验观察到β-catenin-siRNA干扰组穿过 Matrigel基质胶到达下室的平均细胞数较空白对照组和阴性对照组均明显减少(F=136.20，P<0.01)。 结论：干扰β-catenin基因在喉癌Hep-2中的表达可抑制喉癌Hep-2细胞的增殖和侵袭能力，促进喉癌Hep-2细胞的凋亡。 第二部分 siRNA干扰β–catenin基因表达后喉癌 Hep-2细胞对顺铂化疗敏感性的研究 目的：探讨siRNA干扰β–catenin基因表达后喉癌Hep-2细胞对顺铂化疗敏感性的变化。 方法：利用RNA干扰技术干扰喉癌 Hep-2细胞β-catenin基因，RT-PCR和Western-blot从 mRNA和蛋白水平检测目的基因干扰效果;实验分为siRNA-β-catenin-Hep-2干扰组，β-catenin-Neg阴性对照组，空白对照组；MTT法检测不同浓度顺铂对三组细胞的增殖抑制率并计算半数抑制有效药物浓度IC50值，流式细胞仪检查三组细胞相同浓度顺铂刺激后凋亡率的变化。 结果：①通过半数抑制浓度(IC50)计算软件得出顺铂对三组细胞的 IC50值，β-catenin-RNAi干扰组 IC50是(5.81±0.46)μg/mL，得出顺铂对空白对照组的IC50是(10.10±1.01)ug/mL，两组之间的差异具有统计学意义(P<0.001)。②流式细胞仪检测细胞凋亡率，β-catenin-RNAi干扰组细胞凋亡率为（26.15±0.60）%明显高于空白对照组细胞的（14.16±0.05）% t＝19.856 P<0.05。 结论：干扰β-catenin的表达能有效增强喉癌细胞对化疗药物顺铂的敏感性，与顺铂协同促进 Hep-2细胞的凋亡。这为进一步研究喉癌化疗耐药机制提供实验基础。