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目的： 胰腺癌是消化系统中常见的恶性肿瘤，其发病率在全世界和我国都呈逐年上升趋势，2015年我国新增病例约52800例，其中男女病例为2.45:2.83,死亡病例约40700例，胰腺癌已经是我国第10大常见侵袭性肿瘤，在恶性肿瘤患者的致死率中位列第7位。胰腺癌的早期症状不典型，诊断困难，并且容易侵犯胰腺周围组织和发生转移，诊断时多已处于晚期，导致其治疗效果欠佳，手术治疗、放疗和化疗效果均不理想，预后极差，5年生存率低下。CA19-9、CA242等肿瘤标志物对于胰腺癌的临床诊断有一定帮助，但是其特异性低，早期诊断意义有限。近年来，越来越多胰腺癌发生发展的相关分子机制被发现，但是其根本机制仍不清楚。胰腺癌治疗效果差，早期诊断困难，根本原因主要是胰腺癌发生发展的病因及机制迄今仍未完全研究透彻。因此，探索的胰腺癌的发生因素及致病机制，为胰腺癌的综合防治提供新思路具有深远意义。Rab11家族相互作用蛋白质（Rab11-family interacting proteins，R ab11-FIPs)是一个高度保守的蛋白家族，为Rab和Arf GTP酶的效应因子，并与Rab11之间有紧密联系，具有调节回收物质至细胞表面，细胞分裂过程中转运膜至中间体或者卵裂沟，连接 Rab11和分子动力蛋白的作用。研究表明，Rab11-FIPs同时在其他几个重要的细胞功能生理过程中发挥重要功能,包括胰岛素的效应过程、记忆形成过程、免疫和炎症反应、水重吸收、生育、视网膜细胞发育和多种人类癌症，并且多个在肿瘤发生发展的过程中扮演重要的角色。作为第二类FIPs亚家族成员，Rab11家族相互作用蛋白质4（Rab11-family interacting protein4，Rab11-FIP4)特有EF-hand和脯氨酸富含区结构，在细胞内定位于亚细胞结构再循环内体、高尔基体反面网状结构。Rab11-FIP4与 Rabll一起参与膜泡从再循环内体转运至分裂沟的过程，在细胞分裂中晚期中起重要作用。Rab11-FIP4可影响人巨细胞病毒产物的形成，调节HeLa细胞中Rab11距细胞核膜的位置，促进小鼠和斑马视网膜祖细胞的生长。近期研究表明， Rab11-FIP4与HIF-1α在肝癌细胞中存在高表达，并与肝癌恶性程度呈正相关。在低氧条件下，HIF-1α诱导Rab11-FIP4表达，促进肝癌向远处转移，表明肝癌细胞中Rab11-FIP4是HIF-1α的一个靶向基因，即HIF-1α可能为Rab11-FIP4的转录因子。HIF-1α表达与胰腺癌的增殖分化、侵袭转移及临床结果关系密切，但是尚无Rab11-FIP4对胰腺癌发生发展影响的报道，Rab11-FIP4表达的临床病理意义及其对胰腺癌形成产生的影响目前仍不明确。因此，本研究的目的是探索Rab11-FIP4基因对胰腺癌的预后的影响及在胰腺癌细胞生长,侵袭和转移中的作用，为胰腺癌的治疗提供新的策略。 方法： ⑴于温州医科大学附属第一医院、第二医院收集60对胰腺癌术后标本和相应癌旁正常组织样本。通过免疫组织化学方法检测60对胰腺癌组织及癌旁组织中Rab11-FIP4蛋白质表达水平；根据胰腺癌组织中Rab11-FIP4蛋白表达水平，结合患者的临床资料，分析其与患者临床病理数据之间的联系。⑵Real-time PCR检测CFPAC-1, PANC-1和 AsPC-1细胞系中Rab11-FIP4 mRNA表达水平，选择适度表达Rab11-FIP4的细胞系。⑶根据Rab11-FIP4基因序列构造sgRNA，构造GV371-Rab11-FIP4-sgRNA质粒，通过CRISPR/Cas9基因敲除技术敲除PANC-1细胞中Rab11-FIP4基因，荧光显微镜观察慢病毒转染效率，Cruise酶切法检测Rab11-FIP4敲除效率。⑷通过MTT方法分析细胞增殖能力，PI染色法检验细胞周期，Annexin V-APC单染法分析细胞凋亡情况，transwell实验和 Matrigel侵袭实验检测细胞转移和侵袭能力。⑸单因素方差分析比较各组均数，卡方检验或者 Fisher确切概率法比较Rab11-FIP4与临床病理资料之间的关系，Kaplan-Meier评估总体生存情况。 结果： ①胰腺癌组织中Rab11-FIP4表达显著多于癌旁正常组织（P=0.0001）。Rab11-FIP4高表达与肿瘤大小(P=0.0001)，病理分级(P=0.028)，淋巴转移(P=0.001)和TNM分期(P=0.004)显著相关，但与年龄(P=0.832)，性别（P=0.228）和肿瘤大小(P=0.875)无关。并且， Kaplan-Meier生存分析显示Rab11-FIP4高表达与总生存期显著相关（P=0.0036）。②CFPAC-1, PANC-1和AsPC-1中Rab11-FIP4 mRNA相对表达量分别为4.065±0.176，15.368±0.132,21.556±0.006，选择PANC-1进行后续实验。③Cruise酶切法结果提示CRISPR/Cas9基因敲除技术能够有效地敲除PANC-1细胞中Rab11-FIP4基因。④Rab11-FIP4敲除细胞增殖能力下降，抑制细胞周期进展，降低细胞转移和侵袭能力，但不改变细胞凋亡。 结论： Rab11-FIP4高表达提示胰腺癌预后不良，并能促进胰腺癌进展。