论文部分内容阅读
本文研究了生物胺（biogenic amine, BA）在对虾酚氧化酶原系统激活过程中的作用机制。主要探讨了①3种生物胺对凡纳滨对虾Litopenaeus vannamei血细胞数量和酚氧化酶原胞吐的影响;②多巴胺（dopamine,DA）对凡纳滨对虾血细胞作用途径的初步研究;③注射多巴胺、病原菌（Vibrio algino1yticus）对凡纳滨对虾血淋巴生物胺含量和酚氧化酶原系统的影响;④注射多巴胺、病原菌对凡纳滨对虾免疫力的影响。主要结果如下:1.3种生物胺对凡纳滨对虾血细胞数量和酚氧化酶原胞吐的影响多巴胺、去甲肾上腺素（norepinephrine, NE）和5-羟色胺（serotonin, 5-HT）对凡纳滨对虾三类血细胞、总血细胞数量、血细胞酚氧化酶原活力和血细胞释放的酚氧化酶活力影响显著（P<0.05）,且具有时间剂量效应。0.5、1.0和3.0μM的3种生物胺作用20min均会引起对虾三类血细胞数量、总血细胞数量和血细胞酚氧化酶原活力显著降低,血细胞释放的酚氧化酶活力显著升高。相同浓度作用相同时间时,三种生物胺对上述指标的影响从大到小依次为多巴胺、去甲肾上腺素和5-羟色胺。对照组上述各指标在实验时间内均无明显变化。2.多巴胺对凡纳滨对虾血细胞作用途径的初步研究1μM多巴胺作用20min后,三类血细胞数量、总血细胞数量和血细胞酚氧化酶原活力显著降低,血细胞释放的酚氧化酶活力显著升高（P<0.05）。在多巴胺作用前用10、100和500μM D1类多巴胺受体拮抗剂剂SCH23390和D2类多巴胺受体拮抗剂剂舒必利单独或混合孵育20min可显著抑制（但并未完全抑制）多巴胺对三类血细胞数量、总血细胞数量、血细胞酚氧化酶原活力和血细胞释放的酚氧化酶活力的影响（P<0.05）。两种受体拮抗剂对上述各指标的作用具有剂量效应,随作用浓度的增大,抑制效果更加明显;相同浓度的SCH23390比舒必利抑制作用更强;两种受体拮抗剂混合作用比单独使用一种效果显著。3.注射多巴胺、病原菌对凡纳滨对虾血淋巴生物胺含量和酚氧化酶原系统的影响注射50μl 10-6 mol l-1、10-7 mol l-1多巴胺或6.0×105 cells ml-1、6.0×106 cells ml-1溶藻弧菌对凡纳滨对虾血淋巴中3种生物胺含量、三类血细胞和总血细胞数量、血细胞丝氨酸蛋白酶和酚氧化酶原活力、血淋巴酚氧化酶和蛋白酶抑制剂活力影响显著（P<0.05）,且具有时间剂量效应。除多巴胺处理组的丝氨酸蛋白酶活力外,其余各指标均呈峰值变化,但是达到峰值和趋于稳定的时间具有不同步性。注射多巴胺、病原菌后凡纳滨对虾血淋巴中5-羟色胺含量变化趋势相似,分别在1h、6h和3h前显著升高,而多巴胺含量变化趋势相反,分别在3h达到最高和最低值,注射多巴胺组去甲肾上腺素含量3h前显著升高,而注射病原菌组则在1h时达到最大值,之后显著下降。注射多巴胺或6.0×106 cells ml-1溶藻弧菌的凡纳滨对虾总血细胞数量均显著降低,而6.0×105 cells ml-1溶藻弧菌处理组三类血细胞和总血细胞数量在3h前显著升高,之后缓慢下降,6h后趋于稳定;大颗粒细胞比例在3h前略有升高;除多巴胺处理组的丝氨酸蛋白酶活力外,其余酶活各指标分别在1-6h内达到最高或最低值。稳定后,除病原菌处理组的5-羟色胺含量,多巴胺和6.0×106病原菌处理组透明细胞、小颗粒细胞和总血细胞数量,多巴胺处理组丝氨酸蛋白酶活力明显低于对照组外,其余各指标与对照组差异不显著。对照组上述各指标在实验时间内无显著变化。4.注射多巴胺、病原菌对凡纳滨对虾免疫力的影响注射10-6 mol l-1、10-7 mol l-1多巴胺或6.0×105 cells ml-1、6.0×106 cells ml-1溶藻弧菌对凡纳滨对虾血淋巴中3种生物胺含量、总血细胞数量、血细胞吞噬活力、血浆酚氧化酶活力、溶菌活力和血蓝蛋白含量影响显著。生物胺含量和总血细胞数量结果与3.中相同。注射多巴胺或病原菌后,血细胞吞噬活力分别于6h和3h达到最小和最大值,并分别与注射剂量成负相关和正相关;注射多巴胺或6.0×106 cells ml-1溶藻弧菌后溶菌活力于3h达到最小值,6h后趋于稳定,而6.0×105 cells ml-1溶藻弧菌处理组溶菌活力于3h前显著升高;多巴胺和病原菌处理组酚氧化酶活力分别于6h和1h升到最高,12h、3h后趋于稳定。注射多巴胺或病原菌后血蓝蛋白含量分别于6h和3h达到最大和最小值,24h后保持稳定。稳定后除多巴胺和6.0×106 cells ml-1病原菌处理组溶菌活力显著低于对照组,病原菌处理组血蓝蛋白活力显著低于对照组外,其余指标与对照组差异不显著。对照组上述各指标在实验时间内无显著变化。