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本文以代谢工程理论为指导,重点研究了L-苏氨酸高产菌发酵条件的优化。主要研究内容和结果如下:
(1)研究了TRFC高产菌株的摇瓶发酵条件。应用单因素试验、正交实验和响应面设计等方法对种子培养基和发酵培养基进行优化,并对种子培养条件和发酵条件进行了研究。在优化条件下,TRFC菌株摇瓶补料分批发酵48小时,L-苏氨酸达51.99g/L。
(2)根据代谢计量分析、途经分析理论,对L-苏氨酸高产菌在稳态时发酵生产L-苏氨酸进行了代谢计量分析及途径分析,提出了L-苏氨酸合成的总生物量、能量平衡方程和最佳代谢途径、理论转化率86%,为进一步发酵研究提供理论指导。
(3)在10L发酵罐补料分批发酵试验中,确定了补料分批发酵生产L-苏氨酸的最佳条件:初糖浓度70g/L、pH维持在7.1、流加方式为脉冲流加补料。研究了分阶段供氧控制方式对发酵过程的影响。最佳的溶氧控制方式0-12h溶氧30%,12-38h溶氧50%,38-42h溶氧20%。在最佳条件下补料分批发酵42小时,可产L-苏氨酸107.47g/L。
(4)研究了酵母抽提物及甜菜碱添加对发酵过程的影响。确定了酵母抽提物最佳流加浓度为2g/L,最佳流加方式为24-40小时脉冲恒速连续流加,甜菜碱最佳添加浓度为5‰。
(5)在不同温度下,进行发酵试验,提出并验证了L-苏氨酸发酵的变温控制最佳模式为0-12h、37℃;12-24h、39℃;24-40h、39℃。
(6)研究了L-苏氨酸的分离提取工艺。采用金属膜过滤方法,在60℃、操作压力0.5MPa条件下对发酵液进行处理,并采用粉末活性炭常温下进行脱色、强酸性阳离子树脂交换提取,1mol/L氨水作为洗脱剂以4.5倍体积/h的流速进行洗脱。L-苏氨酸提取率最高达81.85%。