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新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)是危害养禽业的重要病原之一。近年来,新基因亚型ⅦhNDV已在东南亚及南非等地区鸡群广泛流行。为了探讨基因Ⅶh亚型NDVGXC110083株感染鸡的致病机理和TLR3、IRF7在NDV感染过程中的作用,本研究分别用NDV GXC110083毒株和中国标准强毒株F48E8感染42日龄的SPF鸡,观察感染鸡临床发病情况,并于感染后(days post inoculation,DPI)1、2、4天分别采集各组鸡的脾脏、胸腺、法氏囊、肾脏、胰腺、十二指肠等组织器官,运用组织病理学、免疫组织化学(immunohistochemistry,IHC)和图像分析等技术来观察各组织器官中NDV病毒抗原、TLR3、IRF7的分布及其动态变化。具体结果如下:(1)NDV感染鸡后各组织器官的病理学变化GXC110083与F48E8毒株感染鸡后均能够在2d内引起鸡明显发病并在4d内出现快速死亡,表现典型的临床症状和剖检病变。病理组织学观察发现,GXC110083和F48E8毒株感染组鸡的脾脏、胸腺、法氏囊、肾脏、胰腺、十二指肠等组织器官均呈现较严重的病理组织学损伤。感染后第1天,GXC110083攻毒组的脾脏、胸腺、法氏囊、肾脏、十二指肠均出现不同程度病变,表现为免疫器官组织中淋巴细胞减少、肾小管上皮细胞变性并有少量坏死及肠黏膜上皮细胞坏死脱落,随着病程的发展,各组织损伤越来越严重,第4DPI时损伤最为严重,所有组织均出现不同程度的坏死,法氏囊淋巴滤泡严重萎缩,且脾脏、胸腺、十二指肠组织的坏死灶内有大量炎性渗出物。而F48E8攻毒组各组织的损伤也很严重,且与GXC110083攻毒组相比,F48E8攻毒组的脾脏、胰腺、法氏囊的损伤更严重些。(2)NDV感染鸡后的病毒的分布及其动态变化IHC结果显示,GXC110083和F48E8感染组均可在1DPI分别从脾脏、胸腺、法氏囊、肾脏、胰腺、十二指肠中检测到病毒抗原,主要出现在淋巴细胞、网状细胞以及各类上皮细胞的胞浆中。GXC110083感染组在感染初期1DPI时在十二指肠、法氏囊、肾脏中的病毒含量最多,在胰腺中的病毒含量最少。在2DPI时,肾脏、法氏囊组织中的病毒含量呈下降趋势,其他组织均呈显著的上升趋势,与感染1DPI相比差异显著(P<0.01)。感染4DPI时,肾脏组织中病毒含量明显上升,其他组织中的病毒含量均下降。F48E8感染组在感染初期1DPI时在十二指肠、脾脏、肾脏中的病毒含量最多,胰腺中的病毒含量最少,在感染2DPI时在脾脏中的病毒含量呈明显的上升趋势,在法氏囊、胸腺、胰腺中的病毒含量变化不明显,肾脏、十二指肠中的病毒含量则明显下降,感染4DPI时法氏囊、肾脏、十二指肠中的病毒含量显著升高,胸腺、脾脏、胰腺中的病毒含量则明显下降。(3)NDV感染SPF鸡后各组织中TLR3表达的动态变化IHC检测结果显示,TLR3在脾脏、胸腺、法氏囊、肾脏、胰腺、十二指肠中均有表达。在感染后第1、2、4天,GXC110083攻毒组脾脏和肾脏中的TLR3表达量均上调,F48E8攻毒组脾脏、胸腺、法氏囊、肾脏中TLR3的表达量均上调,与对照组相比均差异极显著(P<0.01)。GXC110083攻毒组在感染后第2、4天胸腺中的TLR3表达量均上调,在感染后第1、4天法氏囊中TLR3表达量均上调,在感染后1、2天胰腺、十二指肠中TLR3表达量均上调,与对照组相比差异极显著(P<0.01)。F48E8攻毒组感染后第2、4天胰腺中的TLR3表达量上调,在感染后第1天十二指肠中的TLR3表达量上调,与对照组相比差异极显著(P<0.01)。(4)NDV感染SPF鸡后各组织中IRF7表达的动态变化IHC检测结果显示,IRF7在脾脏、胸腺、法氏囊、肾脏、胰腺、十二指肠中均有表达。在感染后1、2、4天,GXC110083攻毒组胸腺、法氏囊、肾脏、胰腺、十二指肠中IRF7的表达量均上调,F48E8攻毒组脾脏、胸腺、法氏囊、胰腺、十二指肠中IRF7的表达量均上调,与对照组相比差异极显著(P<0.01)。在感染后第1、2天GXC110083攻毒组脾脏中IRF7的表达量均上调,在感染后2、4天F48E8攻毒组肾脏中IRF7的表达量均上调,与对照组相比差异极显著(P<0.01)。因此,本研究结果表明,基因Ⅶh亚型NDVGXCI10083和F48E8毒株均能够对SPF鸡的内脏器官造成严重损伤,GXC110083毒株与F48E8毒株感染鸡后能够在1DPI广泛分布于脾脏、胸腺、法氏囊、肾脏、胰腺、十二指肠等器官中,并迅速增殖从而对组织器官造成损伤,两攻毒组各个组织器官中TLR3和IRF7蛋白的表达水平均有显著上调,表明TLR3和IRF7参与了 SPF鸡抵抗GXC110083和F48E8新城疫病毒感染的过程。