论文部分内容阅读
副猪嗜血杆菌病是由副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis,HPS)引起猪的以多发性纤维素性浆膜炎和关节炎为特征的细菌性传染病,又称猪的格拉瑟氏病(Glasser’s disease),存在于所有的主要养猪国家,且流行呈上升趋势,危害日渐严重。疫苗接种和抗生素使用是目前预防和控制HPS感染的主要措施。由于HPS具有多种血清型且具有明显的地方性特征,不同血清型菌株间的交叉保护性较低,血清型与毒力之间的严格关系尚未得到证实。与血清分型相比,基因分型的一个重要优势是能够对所有的分离菌株进行分型,对于区分寄居的无毒菌株与致病的毒力菌株以及促进疫苗的发展具有实际意义。不同国家、不同地区、不同时间的HPS分离菌对抗生素的敏感性存在差异,因而影响着对使用药物的选择。本研究针对2008~2017年安徽地区临床分离鉴定的44株HPS,首先通过PCR技术对分离菌进行血清型鉴定分析;其次运用多位点序列分型(MLST)方法对分离菌进行基因分型研究;最后应用稀释法测定药物对分离菌的最小抑菌浓度(Minimum inhibitoruy concentration,MIC)。旨在了解安徽地区HPS血清型的分布特征,评价安徽猪群中HPS流行的遗传背景和进化关系,以及掌握HPS安徽分离株对药物的敏感性,从而为安徽地区HPS感染的有效防控提供科学依据和技术支撑。结果显示:44株HPS安徽分离株分属7种血清型(4、13、5或12、1、7、14),血清4、13型为优势血清型,各占40.91%;2008~2013年有2种血清型(4、13),分别占55.5%和45.5%,2014~2017年有7种血清型(13、4、5或12、1、7、14),分别占36.4%、27.3%、13.64%、9.09%、9.90%%、4.55%;血清4型在肺、脾、脑的分离率各为41.18%、75.0%、50%,而血清13型在肺、关节、脑的分离率各为44.12%、66.67%、50%。44株HPS安徽分离株分为9个ST型,除ST241外,另8个为新的ST型,ST267和ST268为优势基因型,各占40.91%;2008~2013年有2个ST型(ST267、ST268),分别占55.5%和45.5%,至2014~2017年有9个ST型(ST268、ST267、ST269、ST241、ST270、ST271、ST272、ST273和ST274),分别占36.4%、27.3%、9.09%、4.55%、4.55%、4.55%、4.55%、4.55%、4.55%;位点多态性分析中每个基因位点存在3~7个等位基因,多态性位点数3(g3pd)到37(infB)不等;BURST分析中划分在2个克隆群(Clonal Complexes,CC)和7个单个ST型中,CC241(ST241、ST254、ST94)和CC268(ST268、ST176)包含了我国其他地区和其他国家的ST型;UPGMA Tree分析中优势ST型与其他ST型处于同一进化分支(ST268、ST272、ST274处于同一分支,ST267、ST241处于同一分支),存在3个全部包含具有毒力血清型(4、5或12、13、14)的分支。44株HPS安徽分离株对庆大霉素、青霉素的敏感率分别为100%和93.2%,耐药谱型有34种,86.4%分离株耐受2种及2种以上的药物;2008~2017年分离株对11种抗生素的耐受性逐渐增强;优势血清型和ST型菌株耐药率均为88.9%,其他血清型和ST型菌株耐药率均为75%,两者之间差异不显著(χ2=1.072,P=0.3>0.05)。结果表明:2008~2017年安徽地区HPS的流行菌株血清型和ST型均在逐渐增多,优势血清型为4型和13型、优势ST型为ST267、ST268,是安徽地区Glasser’s disease发生与流行的主要致病菌型。安徽地区HPS主要流行菌株与我国其他地区和其他国家的菌株有亲缘关系,菌株具有较高的遗传异质性,部分新增ST型的出现与流行菌株的变异有关,ST型与毒力血清型具有的一定相关性。安徽地区HPS的耐药率呈上升趋势,多重耐药现象严重,庆大霉素和青霉素为目前临床防治Glasser’s disease的首选药物,HPS的耐药性与其血清型、ST型之间无明显相关性。