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目的:探讨PD-L1反义寡核苷酸对结肠癌CT26细胞系肝转移影响。方法:采用免疫组化S-P法检测大肠癌组织PD-L1表达,免疫荧光法检测大肠癌组织局部CD4~+、CD8~+淋巴细胞数目,并分析PD-L1表达与CD4~+、CD8~+淋巴细胞浸润之间的相关性。应用RT-PCR技术检测PD-L1反义寡核苷酸处理后肿瘤细胞PD-L1的表达情况。同时采用小鼠结肠腺癌CT26细胞系肝转移模型,通过肿瘤细胞脂质体转染PD-L1反义寡核苷酸、腹腔注射PD-L1反义寡核苷酸两种方式,观察PD-L1反义寡核苷酸处理后结肠癌CT26细胞肝脏转移癌结节数量的变化。结果:1. 55例大肠癌组织中,PD-L1阳性表达29例(29/55,52.7%),明显高于对照肠黏膜(1/10,10%),χ~2检验,差异具显著性(P<0.05);在伴有癌转移的33例病例中,PD-L1阳性表达22例(22/33,66.7%),而22例不伴有癌转移病例中,PD-L1阳性表达7例(7/22,31.8%),PD-L1蛋白表达在伴癌转移者高于不伴癌转移者,χ~2检验分析,差别具显著性(P<0.05)。但PD-L1表达在其它各临床病理因素如年龄、性别、病理学分级、浆膜浸润等之间无明显差异(P>0.05)。55例大肠癌组织中,PD-L1阳性者肿瘤局部CD4~+淋巴细胞和CD8~+淋巴细胞数分别为12.241±3.181、25.931±4.390; PD-L1阴性者肿瘤局部CD4~+淋巴细胞和CD8~+淋巴细胞数分别为29.077±4.524、68.539±5.405,Spearman相关分析,肿瘤PD-L1表达与肿瘤局部CD4~+、CD8~+淋巴细胞数均呈负相关(P<0.01)。2. PD-L1反义寡核苷酸及随机寡核苷酸分别转染入小鼠结肠癌CT26细胞后,RT-PCR结果显示肿瘤细胞PD-L1/β-actin比值分别为0.041±0.002、0.524±0.022,抑制率为93%、14.3%,空白对照组(未经任何处理)结肠癌CT26细胞PD-L1/β-actin比值为0.612±0.015。PD-L1反义寡核苷酸CT26细胞转染组PD-L1/β-actin比值与随机寡核苷酸转染组及空白对照组相比较,经单因素方差分析,差别具显著性(P<0.05)。将PD-L1反义寡核苷酸及随机寡核苷酸转染后的结肠癌CT26细胞分别接种于BalB/c小鼠脾脏,14天后,取脾脏原发灶,RT-PCR检测各自PD-L1表达并与空白对照组(未经转染的结肠癌CT26细胞)进行比较,空白对照组、随机寡核苷酸转染处理组、PD-L1反义寡核苷酸转染组,PD-L1/β-actin比值分别为0.615±0.01、0.505±0.005、0.141±0. 007,抑制率分别为0%、17.9%、77%。PD-L1反义寡核苷酸细胞转染组PD-L1/β-actin比值与随机寡核苷酸转染组及空白对照组相比较,经单因素方差分析,差别具显著性(P<0.05)。在小鼠肝转移模型中,PD-L1反义寡核苷酸CT26细胞转染组、随机寡核苷酸转染组及空白对照组肝脏表面转移癌结节数量分别为6.833±4.021、41.500±8.916、46.000±11.541,PD-L1反义寡核苷酸CT26细胞转染组明显少于随机寡核苷酸转染组及空白对照组,经单因素方差分析,差别具显著性(P<0.01)。将结肠癌CT26细胞接种于BalB/c小鼠脾脏,每24h腹腔注射PD-L1反义寡核苷酸及随机寡核苷酸,14天后,分别取脾脏原发灶,RT-PCR检测PD-L1表达,PD-L1反义寡核苷酸腹腔注射组、随机寡核苷酸腹腔注射组PD-L1/β-actin比值分别为0.197±0.008、0.528±0.008,抑制率分别为68%、14.1%,注射PD-L1反义寡核苷酸组与注射随机寡核苷酸组和空白对照组(未进行任何注射)比较,经单因素方差分析,差别具显著性意义(P<0.05)。PD-L1反义寡核苷酸腹腔注射组、随机寡核苷酸腹腔注射组及空白对照组肝脏表面转移癌结节数量分别为7.500±1.871、41.833±7.083、46.000±11.541,PD-L1反义寡核苷酸腹腔注射组肝转移结节数明显少于随机寡核苷酸注射组及空白对照组,经单因素方差分析,差别具显著性(P<0.01)。两种处理方式PD-L1表达及肝转移结节数,经t检验,差别无显著性(P>0.05)。结论:本研究结果提示:1人大肠癌组织表达PD-L1较对照肠黏膜增高,且与大肠癌转移有关; 2大肠癌组织PD-L1对CD4~+、CD8~+淋巴细胞在肿瘤局部的聚集可能具有抑制作用;3 PD-L1反义寡核苷酸能够抑制结肠癌CT26细胞PD-L1表达,对CT26肿瘤细胞肝转移具有抑制作用,其分子机制有待进一步研究。