家蚕BmY14蛋白的表达分析和亚细胞定位研究

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从家蚕蛹期cDNA文库中获得一条序列长度为50.bp的cDNA,其编码的166个氨基酸组成的蛋白质与已知的RNA结合蛋白Y14序列同源性较高,含有一个保守的RNA结合结构域,命名为家蚕类Y14基因BmY1.(Genbank登录号为FJ602787)。该蛋白质预测分子量为18 kDa。我们将其ORF序列克隆到原核表达载体中,构建重组质粒,经双酶切鉴定及序列测定正确后转化大肠杆菌BL21(DE3),用IPTG诱导成功表达该蛋白,并凭质谱鉴定确定表达蛋白为目的蛋白。表达的融合蛋白经亲和层析纯化后,免疫兔获得特异性强的多克隆抗体。利用该抗体以ELISA和Wester.blot检测家蚕七个发育阶段和五龄幼虫多种组织或器官中BmY14蛋白的表达和分布,发现该蛋白在四龄、五龄幼虫、蛹、蛾四个发育阶段均有表达,其中蛹中表达量最高;各个组织或器官中,气囊中表达量最高,其次是血液和生殖器。利用抗体的免疫荧光标记对家蚕Bm5细胞定位,观察到荧光集中分布在细胞核。证实BmY14主要存在核中,在家蚕变态发育过程中,特别在生殖器和气囊的成熟过程中可能起重要作用。
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