【摘 要】
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吸血节肢动物在长期的环境胁迫下,进化出一套有利于其完成吸血活动的分子机制。吸血节肢动物的唾液腺含有很多生物活性物质,能够抑制宿主的凝血反应、炎症反应和免疫反应。因
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吸血节肢动物在长期的环境胁迫下,进化出一套有利于其完成吸血活动的分子机制。吸血节肢动物的唾液腺含有很多生物活性物质,能够抑制宿主的凝血反应、炎症反应和免疫反应。因此吸血节肢动物成为富含抗止血活性、炎症反应调节活性和免疫反应调节活性的生物活性药物资源库。根据活性位点的特异残基,蛋白酶被抑制剂分为四类:氨酸蛋白酶抑制剂、天冬氨酸蛋白酶抑制剂、巯基蛋白酶抑制剂和金属蛋白酶抑制剂四大类。相应地,分成了四种蛋白酶抑制剂。丝氨酸蛋白酶抑制剂按照作用机制可以分为三种类型:经典类、非经典类和serpin(serine protease inhibitors)类。致乏库蚊(Culex quinquefasciatus)是中国常见的库蚊之一,能传播丝虫病和流行性乙型脑炎等疾病。我通过基本文库筛选到致乏库蚊的一条与蛋白酶抑制剂同源性较高的基因序列A3199,并利用大肠杆菌pET表达系统成功地对该基因序列进行了原核表达,然后采用亲和层析、凝胶层析及液相色谱等一系列手段进行目标蛋白质的纯化,最终获得了致乏库蚊A3199的功能蛋白的纯品。对目标蛋白的活性检测,证明其具有丝氨酸蛋白酶抑制剂活性,蛋白酶抑制常数Ki为15.3264 uM。
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