UMSCs对急性肝衰竭小鼠的免疫调节作用的研究

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目的建立小鼠脐带间充质干细胞UMSCs的分离、培养和扩增的方法;确定分离、培养的细胞能够稳定传代,有很强的增殖活性,为以后的细胞移植创造了较好的前提条件。采用四氯化碳建立小鼠急性肝衰竭模型,并观察小鼠的一般状况;了解UMSCs移植对急性肝衰竭的疗效,包括肝功能和肝组织病理变化;观察移植前后血清中IL-4和IFN-含量变化;检测不同时间点肝组织中PD-1mRNA的水平变化。方法应用双酶消化法消化C57BL/6孕鼠脐带组织,行贴壁和传代培养,绘制细胞生长曲线和观察细胞形态。用四氯化碳(CCl4)溶于橄榄油,配成浓度为50%的四氯化碳,予3ml/kg分组腹腔注射给药。小鼠分为三组,实验组、移植对照组和空白对照组,分别在7d、14d、21d检测肝功能。血清IL-4和IFN-含量采用酶联免疫吸附实验(ELISA)测定。取不同时间点的肝组织行石蜡切片和HE染色,观察肝脏病理变化情况。RT-PCR检测不同时间点肝组织中PD-1mRNA的水平表达变化。结果1.以胶原酶和胰酶两步消化法对小鼠UMSCs进行了分离培养,获得了成功。两周之后,主要为长梭形或扁平形的成纤维样细胞,细胞呈束状密集平行排列。经过多次消化、传代后,细胞形态仍为长梭状,且形态更加均匀,有很强的增殖活性。群体倍增时间为24h左右。2.成功建立小鼠急性肝衰竭模型。3.移植组小鼠肝功能和造模组比较差异有统计学差异(P<0.05)。4.移植UMSCs1w、2w、3w后各时间点IL-4和IFN-浓度和造模组比较,IL-4呈上升趋势,而IFN-呈下降趋势。5.UMSCs可改善急性肝衰竭小鼠的炎症浸润,有利于肝小叶结构恢复正常。6.在正常的小鼠肝脏组织中,PD-1有一定的表达,造模组12h、24h、48h PD-1和正常组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。移植UMSCs后24h、48h PD-1和正常组比较,差异无统计学意义(P>0.05),和造模组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论成功建立了小鼠UMSCs的分离及培养体系,传代培养后仍有较强的增殖能力。UMSCs移植可改善肝衰竭小鼠的存活率、肝功能和肝组织病理变化。UMSCs移植可以反映IL-4和IFN-的抗炎/促炎的平衡关系。PD-1可以抑制正向免疫,可能在急性肝衰竭小鼠和UMSCs移植早期肝脏炎症损伤中发挥重要免疫调控作用。
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