家蚕抗菌肽BmGlov1对细菌的抑菌效果研究

来源 :华南农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:D_boy85
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
家蚕抗菌肽Gloverins是一类分子量较大,富含甘氨酸的抗菌肽。Gloverins由四个同系物组成,它们对革兰氏阴性菌有较强的抑制作用,然而其3—D结构和抗菌机理尚未有报导。BmGlov1是家蚕Gloverins族中最原始的一个同系物,本论文将含有Bm Glov1基因的重组质粒转化至表达宿主菌,诱导原核表达BmGlov1并对其进行纯化。在鉴定其抗菌活性的基础上,进一步利用扫描电镜,透射电镜和激光共聚焦显微镜等技术对其抑菌效果进行观察。 将实验室保存的重组质粒pET—21d—BmGlov1转化至大肠杆菌Rosseta宿主菌,对转化宿主菌进行测序鉴定,确认序列正确后以IPTG对转化宿主菌进行诱导表达。表达产物通过Ni—NTA亲和层析的方法纯化,脱盐处理。采用平板抑菌圈法和最小浓度抑菌法分别对脱盐后产物进行抗菌活性测定。用显示抗菌活性的样品分别对革兰氏阴性菌大肠杆菌和革兰氏阳性菌杀螟杆菌进行处理,在扫描电镜,透射电镜和激光共聚焦显微镜下分别观察抗菌肽处理菌、无菌水处理菌和醋酸胺处理菌的形态变化,获得如下主要结果: 1.进一步证明原核表达纯化的BmGlov1对革兰氏阴性菌大肠杆菌有较强的抑菌作用,其最小抑菌浓度为1.25μmoL/L,且随着浓度的增大,抑菌效果增强。BmGlov1对革兰氏阳性菌杀螟杆菌也有一定的抑制作用,其最小抑菌浓度为2.5μmoL/L。 2. BmGlov1处理后的细菌与用无菌水和醋酸胺处理后的细菌比较,在形态结构上发生了改变。扫描电镜观察到BmGlov1处理后的杆菌两端出现内陷,高倍的照片还能观察到从杆菌的中间出现干瘪的现象;透射电镜观察到BmGlov1处理后的细菌细胞壁边缘不完整,出现破裂缺口,细胞质不均匀,且明显减少,从菌体细胞壁破裂处有大量内容物溢出。推测扫描电镜所观察到的干瘪现象可能因为细胞壁破裂大量内容物外泄所致。 3.用FITC荧光染料成功地标记了BmGlov1,激光共聚焦显微镜下观察到,标记了的BmGlov1聚集在杀螟杆菌周围,杀螟杆菌的细胞形状清晰可见,随着时间的延长,某些菌体上的荧光信号慢慢消失,而某些菌体的荧光信号也渐变模糊。然而因为放大倍数有限,未能观察到菌体的细微的形态变化,但该方法为进一步同时用其他染料标记菌体细胞核的尝试提供了参考。 本论文对原核表达的BmGlov1抑菌效果的初步研究结果将为进一步阐明BmGlov1的抑菌机制和BmGlov1的3—D结构研究提供基础数据,具有重要的理论意义。
其他文献
近年来,象耳豆根结线虫(Meloidogyne enterolobii)作为重要的根结线虫之一,越来越受到国内外研究者的关注。本文以象耳豆根结线虫食道腺分泌的果胶酸裂解酶基因、纤维素结合蛋
目的:研究与分析锁骨骨折患者应用臂丛联合颈浅丛阻滞的麻醉效果.方法:选取我院收治的锁骨骨折患者90例为对象进行研究,利用计算机随机分组为对照组1、对照组2以及观察组,各3
目的 探讨呼吸功能锻炼器对心脏搭桥手术病人术后肺部功能、肺部并发症以及生活状态的影响.方法 分析2014年6月-2017年6月74例我院住院接受心脏搭桥手术治疗的病人,与常规呼
摘要:近年来,随着经济社会的发展和进步,我国医疗卫生事业也有了实质性的突破,无论是现有的医疗卫生基础设施还是医护水平都较以往有了明显提升,很好的满足了人民群众不断增长的医疗卫生服务需要,人们群众对于医疗行业提供的各项服务的满意度也是不断提升。但是,在许多医院当中,还是存在着不少的问题,不少医护人员的工作态度、业务技能等有待于进一步提高,只有这样才能更好的减少医闹问题,进一步营造和谐的医患关系。  
目的:探究合肥市养老机构中老年性痴呆的发生率以及相关因素.方法:本次研究对象为合肥市养老机构中超过60岁的群体,通过IADL与MMSE来评估研究对象的认知情况,通过GDS与自制的
目的:随着慢性心力衰竭患者发病率的提高,本次研究拟从中医角度探讨参附保心汤的临床治疗疗效.方法:收集近几年我院诊断为慢性心力衰竭的患者,随机分为研究组和对照组.2组基
目的:出血占脑卒中的10%-20%,也是目前循证医学所证实的治疗有效手段较少的卒中之一.对脑出血进行综合管理并规范治疗能够降低病死率,缩短住院时间,改善脑出血的预后.临床上
该文以油菜菌核病优异生防微生物的创新为主旨,研究了调节基因与群体密度传感信号对成团肠杆菌生防基因表达的分子调控,及其作为生防菌遗传改良途径的潜能;从自然界丰富的微
目的了解石化行业职业病危害情况,提出治理措施.方法对某石化企业近三年职业卫生相关资料进行分析.结果该企业工作场所除了噪声外,其它职业病危害因素检测结果均未超标;职业
文主要依据液晶面板驱动原理,液晶屏不同亮度调整可通过液晶不同角度旋转实现,即进行电压分压实现,液晶是不能自主发光的,还是需要 BL 提供背光源,这种方法调光设计复杂,影响测试
期刊