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hGM-CSF是一种重要的造血调控因子，能诱导粒细胞前体和巨噬细胞前体细胞呈集落性生长，在促进粒细胞恢复方面疗效显著，具有重要的临床应用价值。由于糖基化程度和派生细胞类型的不同，重组细胞能产生多种形式、大小不同的hGM-CSF，其分子量变化从16-50 kDa。糖基化可影响hGM-CSF的药代动力学性质，抗原性和毒性，对于延长血清半衰期有很重要的作用，糖基化程度高的动物细胞源的rhGM-CSF在体内稳定性方面优于酵母和大肠杆菌源的，因此纯化家蚕杆状病毒表达的hGM-CSF以及分析其糖基化有一定的研究意义。
本研究首先对接种hGM-CSF的蚕蛹粉进行了Western blot鉴定，在PVDF膜上能杂交到特异性条带，通过夹心法ELISA检测到蚕蛹粉中hGM-CSF蛋白的含量为2‰左右。而后开展了小规模纯化预实验，蚕蛹粉中含有大量的杂质及油脂，因此采用高速离心、硫酸铵分级沉淀和超滤对蚕蛹粉进行粗纯化，通过Resource Q阴离子交换色谱能使目的蛋白得到富集，进行免疫共沉淀进一步纯化目的蛋白，得到了微量较纯的hGM-CSF。家蚕杆状病毒表达的hGM-CSF不带His、GST等标签，只能采用离子交换色谱、亲和层析、分子排阻色谱等方法来达到纯化的目的，而采用亲和层析方法进行大规模纯化需要大量的抗体，因此在进行小规模纯化实验的同时，免疫新西兰雄兔制备了hGM-CSF多克隆抗体，获得了大量多克隆抗血清，并将抗体用亲和层析柱纯化，为接下来的大规模纯化实验奠定了基础。大规模实验通过高速离心、硫酸铵分级沉淀和超滤对蚕蛹粉进行粗纯化，采用DEAE阴离子交换色谱和抗体亲和层析柱进一步纯化，获得了一定量(2 mg)较纯的hGM-CSF，而通过这些方法的纯化，hGM-CSF的含量也由最初的2.30‰上升到了204.50‰。利用N型糖苷酶PNGase F和Endo H对较纯的hGM-CSF进行了酶切去糖基化分析，去糖基化后的hGM-CSF在SDS-PAGE和Western blot上显示比去糖基化前小1-2 kDa，说明hGM-CSF蛋白有N型糖苷链修饰，而去糖基化后比预期的分子量还要大，可能存在潜在的O-糖基化。挖点对去糖基化前后的蛋白进行质谱检测，质谱鉴定结果为hGM-CSF蛋白，Sequence Coverage达到43％。