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胃癌是世界范围内最常见的恶性肿瘤之一,其发病率和死亡率在我国均居第二位,远远高于世界水平。大多数患者在有症状就诊时已进入中晚期,失去了外科手术机会,这主要是由于胃癌的发生发展机制尚不清楚,临床上缺乏有效的早期诊断指标及早期有效的治疗。恶性肿瘤的局部浸润、远处转移、再次复发和多药耐药是胃癌患者晚期死亡的主要原因,因此研究其恶性表型的机制十分有必要,同时对于胃癌的早期诊断及治疗也有一定的指导意义。人类NDRG家族由NDRG1、NDRG2、NDRG3、NDRG4共同组成,各成员之间约57%~65%的氨基酸具有同源性,其中NDRG2是由我国第四军医大学生物化学与分子生物学教研室首先克隆并报道的。众多研究表明,NDRG2在大多数肿瘤中表达下调,在胃癌中也有类似报道,但其对胃癌的细胞学水平影响及其相关分子机制尚不完全清楚,有待进一步深入的研究。目的:NDRG2是一个潜在的肿瘤抑制基因,在胃癌组织中低表达。本课题旨在探讨NDRG2基因对胃癌细胞恶性表型的影响。方法:1.通过Western Blot、Real-Time PCR验证NDRG2在永生化的正常胃上皮细胞GES及胃癌细胞系(MKN-28、MKN-45、AGS、SGC-7901、BGC-823)中的表达水平。2.通过瞬时转染使pc DNA3.1-NDRG2、pc DNA3.1、si RNA-NDRG2、si RNA-negetive进入AGS细胞内,使用RT-PCR及Western Blot验证转染效率;将实验设置为pc DNA3.1-NDRG2(上调表达载体组)、pc DNA3.1(对照组)、si RNA-NDRG2(下调表达载体组)、si RNA-negetive(对照组)四组,并采用MTT及平板克隆实验检测细胞的体外增殖能力、采用流式细胞仪分析细胞的凋亡。3.转染pc DNA3.1-NDRG2、pc DNA3.1、si RNA-NDRG2、si RNA-negetive后通过Western Blot检测NDRG2与Bcl-2之间的关系;通过购买组织芯片运用免疫组织化学技术初步检测NDRG2和Bcl-2在胃癌组织中的表达模式,再次通过收集临床标本及相关病理资料,扩大样本量运用免疫组织化学技术检测NDRG2和Bcl-2在胃癌组织中的表达模式,并利用统计学软件分析NDRG2和Bcl-2与临床病理资料间的关系。结果:1.通过Western Blot、Real-Time PCR发现NDRG2在胃癌细胞中低表达,在AGS细胞中表达量居中,可用于后续构建过表达载体及低表达载体的研究。2.通过Western Blot、RT-PCR发现AGS细胞转染pc DNA3.1-NDRG2、si RNA-NDRG2后与对照组相比NDRG2 m RNA及蛋白水平会分别增高与降低;MTT发现pc DNA3.1-NDRG2组与pc DNA3.1组相比细胞增殖能力明显减弱,si RNA-NDRG2组与si RNA-negetive组相比细胞增殖能力明显增强;平板克隆实验发现pc DNA3.1-NDRG2组与pc DNA3.1组相比细胞克隆形成能力明显减弱,si RNA-NDRG2组与si RNA-negetive组相比细胞克隆形成能力明显增强;流式细胞仪检测细胞凋亡发现pc DNA3.1-NDRG2组与pc DNA3.1组相比细胞凋亡明显增加,si RNA-NDRG2组与si RNA-negetive组相比细胞凋亡明显减少。3.通过Western Blot发现转染pc DNA3.1-NDRG2后Bcl-2明显减少,而转染si RNA-NDRG2后Bcl-2明显增加;利用免疫组织化学技术发现NDRG2在胃癌组织中与胃正常组织相比低表达,而Bcl-2在胃癌组织中与胃正常组织相比高表达,二者并呈负相关,通过统计相关临床病理资料发现NDRG2和Bcl-2在胃癌组织中的表达阳性率与年龄、性别无关,而与肿瘤分化程度、临床分期、淋巴结有无转移相关。结论:NDRG2能够抑制胃癌细胞的增殖、促进胃癌细胞的凋亡,初步发现NDRG2在胃癌中发挥抑癌作用可能与Bcl-2有关,但具体两者之间的机制还有待进一步深入的研究。